膠東某醫院西弗射盾子囊霉近10年檢出與藥敏分析

來源:用戶上傳      作者:鄭娟娟,刁瑋,田婷婷,王??,王宏偉,李靜

　　[摘要]目的 總結青島大學附屬醫院近10年西弗射盾子囊霉的檢出情況，明確西弗射盾子囊霉的分離培養、鑒定及藥敏特征，為臨床診斷及治療提供用藥依據。方法 收集整理青島大學附屬醫院近10年檢出西弗射盾子囊霉的臨床病例資料。采用常規方法接種、培養送檢標本，觀察分離菌的革蘭染色及菌落生長特點。用VITEK 2 Compact細菌鑒定藥敏儀及酵母鑒定卡和VITEK MS質譜對分離出的可疑病原真菌進行鑒定;用ATB Fungus 3進行酵母菌藥敏試驗。結果 青島大學附屬醫院2011―2021年間自臨床標本中共檢出8株西弗射盾子囊霉，該菌革蘭染色陽性，在科瑪嘉顯色培養基上呈圓形、中心藍色、邊緣白色的菌落。VITEK 2 Compact和VITEK MS質譜鑒定系統均鑒定為西弗射盾子囊霉。藥敏結果顯示，伏立康唑敏感率100%，兩性霉素B敏感率86%，氟康唑敏感率38%，5-氟胞嘧啶敏感率43%，伊曲康唑敏感率12%。結論 西弗射盾子囊霉近年檢出增加，其革蘭染色具有念珠菌特征，在一般培養基上均可生長，在科瑪嘉顯色培養基上菌落生長最具特征。檢出菌株對伏立康唑敏感率最高，其次是兩性霉素B，對伊曲康唑敏感率最低。
　　[關鍵詞]西弗射盾子囊霉;真菌;微生物敏感性驗;醫院
　　[中圖分類號]R446.5;R379.2
　　[文獻標志碼]A
　　[文章編號]2096-5532（2022）04-0509-04
　　doi：10.11712/jms.2096-5532.2022.58.124[HT]
　　[開放科學（資源服務）標識碼（OSID）]
　　[網絡出版]https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20220628.1712.001.html;[JY]2022-06-3010：25：59
　　DETECTION OF STEPHANOASCUS CIFERRII IN A HOSPITAL OF JIAODONG， CHINA IN RECENT 10 YEARS AND ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY ANALYSIS
　　ZHENG Juanjuan， DIAO Wei， TIAN Tingting， WANG Zhe， WANG Hongwei， LI Jing
　?。―epartment of Inspection， Medical College of Qingdao University， Qingdao 266071， China）
　　[ABSTRACT]Objective[WTBZ] To summarize the detection of Stephanoascus ciferrii in the Affiliated Hospital of Qingdao University in recent 10 years， to investigate the isolation， culture， identification， and antimicrobial susceptibility characteristics of S.ciferrii， and to provide a basis for clinical diagnosis and treatment and medication.
　　Methods The clinical data of patients in which S.ciferrii was detected in the Affiliated Hospital of Qingdao University in recent 10 years were collected. Samples from patients were inoculated and cultured by conventional methods， and the characteristics of Gram staining and colony growth of isolated fungi were observed. The isolated suspected pathogenic fungi were identified by VITEK 2 Compact Automated ID/AST Instrument and Yeast Identification Card and VITEK Mass Spectrometry （MS）. ATB Fungus 3 was used in the antimicrobial susceptibility test of yeast.
　　Results A total of eight strains of S.ciferrii were identified in clinical samples in the Affiliated Hospital of Qingdao University in 2011―2021. The strains were positive for Gram staining， and grew in round colonies with blue center and white edge on the CHROMagar colored medium. The fungus was identified as S.ciferrii by VITEK 2 Compact and VITEK MS. The results of the antimicrobial susceptibility test showed a susceptibility rate to voriconazole of 100%， to amphotericin B of 86%， to fluconazole of 38%， to 5-fluorocytosine of 43%， and to itraconazole of 12%.

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　　Conclusion The detection of S.ciferrii is increasing in recent years. Stephanoascus ciferrii shows the characteristics of candida by Gram staining， and can grow on common media. The colony grown on the CHROMagar colored medium is of typical characteristics. The detected strains show the highest susceptibility rate to voriconazole， followed by to amphotericin B， and the lowest susceptibility rate to itraconazole.
　　[KEY WORDS] Stephanoascus ciferrii; fungi; microbial sensitivity tests; hospitals
　　
　　西弗射盾子囊霉（Stephanoascus ciferrii）最早由KREGER-VAN RIJ[1]在1965年報道，曾用名西弗念珠菌（Candida ciferrii）、類西弗念珠菌（Candida allociferrii）和西弗毛滴蟲（Trichomonascusciferrii），屬于子囊菌類酵母。子囊菌的形態特征差別很大，其共同特征是有性生殖形成子囊孢子，是一類非常少見的機會致病性真菌[2-3]。目前，國內外在病人指甲、痰液、腦脊液、腹膜透析液、外耳道分泌物和血液標本中均有西弗射盾子囊霉的檢出報道，在貓耳分泌物、六堡茶中也有分離成功的報道[4-7]。青島大學附屬醫院近10年共檢出西弗射盾子囊霉8株。本文從臨床特點、形態學、培養特性及藥敏試驗結果等方面對8株西弗射盾子囊霉進行分析，以期為臨床少見病原菌感染檢出和用藥提供參考。
　　1資料與方法
　　1.1研究對象
　　2011年1月―2021年1月，青u大學附屬醫院共檢出西弗射盾子囊霉陽性病人8例。男性3例，女性5例;年齡35～64歲，其中年齡41～64歲者7例。2011―2015年檢出2例，2016―2021年檢出6例。標本來自血液內科1例，耳鼻喉科6例，眼科1例;標本類型為血液1例，耳分泌物6例，眼分泌物1例。其中1例病人診斷為急性淋巴細胞白血?。∕2型），住院期間有反復發熱癥狀，血培養檢出西弗射盾子囊霉;1例病人因“左眼疼痛伴流淚、視物不清”就診，眼拭子培養出西弗射盾子囊霉;6例病人因“外耳流膿”入院，耳分泌物培養檢出西弗射盾子囊霉。8例病人均根據藥敏結果給予抗感染治療和對癥治療，出院3個月后隨訪，癥狀好轉，未見明顯并發癥。
　　1.2試劑與儀器
　　所用MH平板（Mueller-Hinton agar plate）、血瓊脂平板、科瑪嘉顯色平板以及沙保弱培養基平板，VITEK 2 Compact梅里埃全自動細菌鑒定藥敏系統及酵母菌鑒定卡（YST），ATB Fungus 3真菌藥敏試劑條、基質輔助激光解析電離飛行時間質譜VITEK MS、比濁儀DensiCHEK Plus，均為法國生物梅里埃公司產品。
　　1.3菌種鑒定與藥敏試驗
　　嚴格按照細菌培養標準化操作規程對送檢標本進行處理和常規培養，將標本分別接種于MH平板和血瓊脂平板，培養24 h后觀察菌落生長狀態。取菌落涂片后進行革蘭染色顯微鏡檢，高倍鏡（1 000倍）下觀察。選單菌落轉種科瑪嘉顯色平板及沙保弱培養基平板，分別置35 ℃及28 ℃培養，24 h后觀察菌落形態，并涂片進行革蘭染色鏡檢。按操作規程配制2.0濁度的菌液，用VITEK 2 Compact配套酵母菌鑒定卡（YST）進行菌種鑒定，另外取菌涂布VITEK MS靶板進行質譜儀鑒定;同時用ATB Fungus 3酵母菌藥敏測試條，對菌液進行體外藥敏試驗，按說明書操作。
　　2結果
　　2.1菌落特征
　　菌落在MH平板、血瓊脂平板、科瑪嘉顯色平板、沙保弱培養基平板中均能生長，且在28 ℃和35 ℃條件下均生長良好。血瓊脂平板35 ℃培養24 h后可見表面光滑呈乳白色的圓形小菌落，在培養3 d后，菌落呈鑲嵌生長，質地硬，不易研碎（圖1A）;沙保弱培養基平板28 ℃培養1周，菌落呈淡黃色，中心呈菜花狀，邊緣有粗糙褶皺的大菌落;科瑪嘉顯色平板培養24 h，可見圓形光滑藍色小菌落，延長培養時間，邊緣逐漸變白，呈現中心藍色、邊緣白色的“小蘑菇”狀，繼續培養，菌落開始變粗糙，邊緣不整并出現腦回狀溝槽（圖1B）。28 ℃條件下較35 ℃生長緩慢，菌落形態較小。
　　2.2革蘭染色檢查
　　菌落涂片革蘭染色鏡檢，可見革蘭陽性酵母樣孢子及細長菌絲，孢子為單細胞、卵圓形、沿菌絲排列生長（圖2A、B）。
　　2.3質譜檢測
　　取血瓊脂平板上的單個菌落涂布于VITEK MS靶板上，加入0.5 μL甲酸，自然干燥后再加入1.0 μL基質液（4-羥基-2-甲基肉桂酸），自然干燥后采用VITEK MS儀進行該菌的蛋白指紋圖譜檢測，結果鑒定為西氟射盾子囊霉，置信度為99.9%。并重復實驗，重復鑒定符合率100%。
　　2.4VITEK 2 Compact酵母菌鑒定卡（YST）鑒定
　　按儀器的標準操作規程操作和判定結果。取血瓊脂平板上的單個菌落配制2.0濁度的菌液，放入VITEK2 Compact酵母菌鑒定卡，然后置VITEK 2 Compact中，經18～22 h鑒定結果為西氟射盾子囊霉，準確度99.9%。

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　　2.5藥敏試驗
　　按標準操作規程用ATB Fungus 3酵母菌藥敏測試條檢測8株菌對常見抗真菌藥物的敏感性，結果以最低抑菌濃度（MIC）表示，其藥物敏感率分別為伏立康唑（MIC≤1.0 mg/L）100%，兩性霉素B（MIC≤0.5 mg/L）86%，氟康唑（MIC≤64.0 mg/L）38%，5-氟胞嘧啶（MIC≤32.0 mg/L）43%，伊曲康唑（MIC≤2.0 mg/L）12%。
　　3討論
　　本文總結分析了青島大學附屬醫院近10年西弗射盾子囊霉的檢出情況，作為臨床罕見機會致病菌，其檢出率近年有增加趨勢。分析原因可能與以下幾點有關。①腫瘤、血液病等疾病發生率的增高和移植、抗生素、糖皮質激素等治療手段的大量使用，損傷機體屏障和免疫力，使機會致病性真菌感染率明顯增加。從國內外文獻報道可以看出，合并西弗射盾子囊霉感染的病人，其臨床病程長短不一，但在高齡、惡性腫瘤及服用免疫抑制劑等免疫力低下病人中檢出率更高[5，8-9]。②臨床對真菌感染的關注度增高，增加了樣品送檢，提高了檢出率。③實驗室真菌檢測技術手段的發展提高了檢出率。分析本研究中的6例慢性中耳炎病人，結合張繼東等[10]和賀文芳等[11]報道的病例，我們發現西弗射盾子囊霉相關慢性化膿性中耳炎主要臨床表現為外耳道奇癢，常搔刮至皮膚破損后方可解癢，以致出現耳道流膿，膿液呈黃色，稀薄略帶臭味，多伴耳鳴，治療不及時可導致鼓膜穿孔引起聽力下降。對于合并西弗射盾子囊霉感染的中耳炎，外科手術可取得比較理想的治療效果。
　　西弗射盾子囊霉在MH平板、血瓊脂平板和沙保弱培養基平板等臨床常用培養基上均可生長，且在28 ℃和35 ℃均生長較好。特征最明顯的是，該菌在科瑪嘉念珠菌顯色培養基上呈現中心藍色、邊緣白色的腦回狀菌落，易于觀察。根據菌落形態及對該菌鏡檢可以初步判斷病人為真菌感染，結合文獻報道西弗射盾子囊霉可同化利用大多數碳水化合物和氨基酸等的生化反應特性，可與其他真菌進行鑒別[12-13]。這有利于進一步的真菌鑒定和抗真菌藥物的藥敏試驗，為臨床治療爭取時間和提供藥敏依據。有條件的醫院還可以用現代分子檢測技術快速鑒別該真菌。
　　國外學者PFALLER等[14]的一項持續10年的關于念珠菌屬對氟康唑和伏立康唑藥物敏感性監測的研究@示，分離出的西弗射盾子囊霉對氟康唑的敏感率為50%，對伏立康唑的敏感率為50%。SOKI等[15]分離出對氟康唑耐藥的菌株。本文西弗射盾子囊霉的藥敏情況為，伏立康唑敏感率最高，其次是兩性霉素B，伊曲康唑敏感率最低。因此，臨床用藥時在排除用藥禁忌后，可優先考慮伏立康唑，為臨床有效治療爭取時間。真菌耐藥機制主要為膜通透性降低使細胞內藥物濃度降低，藥物作用靶酶增多、缺失或者結構改變以及細胞壁合成障礙等[16]。本研究中2015年檢出菌株對氟康唑敏感，2020年檢出菌株則出現耐藥，是否與培養過程有關或基因突變引起尚需深入研究。
　　總而言之，西弗射盾子囊霉是一種非常少見的機會致病性真菌，主要見于免疫力低下病人，在中青年及免疫力正常人群中偶見合并感染[17-18]。因此，對于就診病人，應詳細詢問病史、服藥史，對于發熱原因不明病人，應做分泌物培養、血培養甚至骨髓培養，必要時可聯系實驗室延長培養時間。另外，臨床實驗室應加強對該菌的認識，及時準確地分離鑒定該菌，并積極開展抗真菌藥物的敏感試驗，以便為臨床醫師早期合理選擇抗真菌藥物提供參考，從而有助于正確治療和有效控制真菌感染，減少耐藥菌株的產生。
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