從進境草籽中截獲剪股穎粒線蟲的體會

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　　摘要：剪股穎粒線蟲是我國檢疫性有害生物，但該線蟲截獲較難。上?？诎哆B續2年在進境草籽中截獲該線蟲，現將截獲經驗整理總結，以期為其他口岸提供參考借鑒。
　　關鍵詞：剪股穎粒線蟲;牧草種子;截獲
　　剪股穎粒線蟲（Anguina agrostis）是牧草和草坪上重要的有害生物，被我國列入檢疫性有害生物名錄。1997年～2003年，我國口岸曾數次在進口草籽中截獲該線蟲，但此后10余年來我國未見有記錄截獲該線蟲。2017～2018年，上海口岸先后2次分別在進境草籽中截獲該線蟲，現將檢疫過程中的體會整理如下，以期為口岸檢疫部門提供技術參考。
　　1截獲
　　2018年3月，上海進口一批美國俄勒岡州細弱剪股穎（Agrostis tenuis）草種，總重11.34t。3月28日在外高橋港口采集樣品并送到實驗室。鑒于美國是剪股穎粒線蟲的分布區，且剪股穎植物是該線蟲的典型寄主，故對送檢的樣品進行仔細檢查。經前期試驗發現，采用直接挑取蟲癭法分離獲得的粒線蟲數量較多，故采用直接挑取蟲癭法檢驗該批樣品。獲取蟲癭后，用挑針刺破蟲癭，有大量線蟲逸出。將獲得的線蟲采用形態學及分子相結合的方法進行鑒定，經確認該線蟲是剪股穎粒線蟲。
　　2檢測過程中的體會
　　2.1加大對重點樣品的檢測力度
　　近年來，我國草籽進口量越來越大，其中禾本科草籽占多數。剪股穎粒線蟲的寄主較廣泛，可為害禾本科植物10多個屬，其中黑麥草屬（Lolium s p.）、早熟禾屬（Poa spp.）、羊茅屬（Festuca spp.）等草籽都是我國進口量較大的草籽。據統計，美國、加拿大、丹麥、新西蘭、荷蘭等國是我國草種進口的主要國家，上述國家均有剪股穎粒線蟲分布，應引起檢疫部門高度重視。據統計，我國口岸曾在彎葉畫眉草、剪股穎、匍匐莖剪股穎（Agrostis stolonKera）、細弱剪股穎（Agrostis tenuis）中截獲剪股穎粒線蟲，口岸若發現這類樣品應重點查驗。
　　2.2線蟲的分離方法
　　本實驗室前期研究發現，對剪股穎草籽、匍匐莖剪股穎、細弱剪股穎等剪股穎屬（Agrostis）草籽類樣品，采用直接挑取蟲癭法分離粒線蟲具有分離數量大、耗時少的優點，故對該類樣品采用直接挑取蟲癭法進行分離。挑取時要注意每次選取的樣品盡量少，以使樣品盡量散開平鋪，互相不重疊。當發現顏色較深（黑色或棕色）的雜質時（見圖1），盡量都挑取出來。進一步置于解剖鏡下觀察。
　　經觀察，典型的剪股穎粒線蟲草籽，頭尾略尖，中間較寬，呈紡錘形;比正常的植物種子大一些（圖2）。對疑似蟲癭的雜質，滴入數滴清水，稍加濕潤后，采用解剖針挑破、刺破，進一步觀察是否有線蟲逸出。
　　2.3線蟲的鑒定
　　采用傳統的形態學與分子生物學相結合的方法進行鑒定?？刹捎?8S和ITS區通用引物擴增線蟲核糖體DNA，將所得PCR產物進行測序，并進行序列比對及系統發育分析;也可參照國標中的特異引物對線蟲進行PCR擴增，觀察是否產生特異性條帶。
　　3總結
　　近年來，我國牧草及草坪草種子進口量較大。據統計，2011～2014年，上海口岸進境種子數量達5.373萬t，其中禾本科種子占絕大多數，占總量的92.87%。剪股穎粒線蟲是禾本科植物非常重要的病原線蟲，口岸應加大檢疫力度，以防該線蟲傳人我國。
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