化妝品中七種抗生素高效液相檢測方法研究

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　　摘 要：建立高效液相色譜法檢測化妝品中的鹽酸美滿霉素、甲硝唑、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素和氯霉素7種抗生素。流動相為0.005mol/L草酸溶液，磷酸調pH為2.3，Agilent Eclipse Plus C18（4.6×150mm，5μm） 色譜柱，帶有紫外檢測器的高效液相色譜儀檢測化妝品中7種抗生素，根據色譜峰的保留時間定性，外標法定量。結果表明在1-100 mg/L的濃度范圍內，線性相關系數均大于0.99，回收率為93.1%～101.3%，RSD為0.3%～2.3%（n=6）。本方法準確可靠，靈敏度高，操作簡便，可滿足檢測工作需求。
　　關鍵詞：高效液相色譜;化妝品;抗生素
　　0 引言
　　抗生素[1]對祛痘治療皮炎等有很好的效果，但長期使用抗生素會使細菌變異產生耐藥性，造成過敏或者藥疹的現象，嚴重會導致人體免疫力下降。國家食品藥品監督管理局在《化妝品安全技術規范》（2015版）[2]中已明確規定在化妝品中禁止添加抗生素。現仍有不法商家在化妝品中違規添加抗生素，所以建立準確可靠的化妝品抗生素檢測方法具有十分重要的意義。本文用高效液相色譜法[3]對化妝品中的鹽酸美滿霉素、甲硝唑、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素和氯霉素7種抗生素進行了分析與探討。
　　1 實驗部分
　　1.1 儀器和試劑
　　Agilent 1200 series高效液相色譜儀，紫外檢測器，分析天平;超聲波清洗器;高速離心機;pH計;純水儀。甲醇、乙腈（色譜純）;草酸（分析純）;鹽酸（優級純）;標準品是鹽酸美滿霉素、甲硝唑、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素和氯霉素，實驗用水為一級水。
　　1.2 色譜條件
　　色譜柱是Agilent Eclipse Plus C18（4.6×150mm，5μm），進樣量10μL，柱溫30℃，檢測波長268nm，流速1.0mL/min，流動相是0.005mol/L草酸溶液（磷酸調pH為2.3）+乙腈行梯度洗脫，梯度洗脫程序是0～6.0min，乙腈：草酸=18：82;6.1～15.0min，乙腈：草酸=25：75;15.1～17.0min，乙腈：草酸=18：82。
　　1.3 標準溶液配制
　　分別稱取7種抗生素對照品適量，用甲醇溶解，配制成質量濃度為100 mg/L的混合標準溶液，再逐級稀釋成濃度為1、5、10、20、50和100 mg/L的混合標準系列溶液。
　　1.4 樣品處理
　　稱取1g樣品于10mL具塞比色管中，加入甲醇+0.1mol/鹽酸（1+1）混合溶液至刻度，振搖，超聲提取30min，10000rpm高速離心5min，上清液經0.45μm濾膜過濾，上機。
　　2 結果與討論
　　2.1 結果
　　質量濃度為5μg/mL的7種抗生素混合標準品的色譜圖，見圖1。
　　2.2 流動相組成及pH的選擇
　　按照標準方法用甲醇—乙腈—草酸行等度洗脫，發現7種抗生素不能完全分離，將3種流動相按照不同的比例行梯度洗脫，雖能有效分離7種抗生素，但基線發生漂移影響積分和定量?？紤]有機溶劑乙腈吸收比甲醇小，使用乙腈—草酸作為流動相，配制濃度為0.005mol/L的草酸溶液按1.2方法進行分離，發現除溶劑峰與鹽酸美滿霉素發生重疊，其他6種目標物均能完全分離，為了使溶劑峰與鹽酸美滿霉素分離，調節流動相pH為2.3時能使7種目標物完全分離，且峰形尖銳對稱，靈敏度高。不同儀器柱外死體積和柱效不同，溶劑峰與鹽酸美滿霉素分離情況不同，可適當調節草酸溶液濃度、pH及梯度時間使目標物分離。
　　2.3 線性范圍及檢出限
　　配制1、5、10、20、50和100mg/L的混合標準系列溶液，以本方法分析，以7種抗生素濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標做線性回歸方程，以信噪比（S/N）為3時對應的濃度為檢出限，鹽酸美滿霉素、甲硝唑、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素和氯霉素7種抗生素的線性回歸方程分別為Y=7.840X+4.381、Y=10.327X+5.247、Y=9.473X+3.647、Y=8.725X-1.676、Y=10.194X-4.085、Y=13.910X-0.804和Y=15.081X+3.214，線性相關系數均大于0.99，檢出限分別為 0.44、0.38、2.16、2.54、2.22、3.03和0.86 mg/kg。
　　2.4 精密度及回收率
　　稱取不含待測組分的化妝品樣品1.0 g共20份，其中2份按照實驗方法正常操作，另外18份分成3組，分別添加含有7種抗生素的混合標準儲備液，制成20、50和100mg/kg 3組不同濃度的樣品做三水平六平行的添加回收試驗，實驗結果是7種抗生素的平均回收率為93.1%～101.3%，RSD為0.3%～2.3%（n=6），平均回收率和精密度見表1。
　　3 結論
　　本文采用高效液相色譜法對化妝品中7種抗生素進行檢測，該方法不僅前處理簡單，操作方便，且具有分離效果好，分析快速，低檢出限，高靈敏度和精密度等特點，能夠符合實驗室對化妝品的檢測要求。
　　參考文獻：
　　[1]吳大南，鄭和輝，楊麗華，李潔，祛痘除螨類化妝品中檢出抗生素情況的調查[J].中國衛生檢驗雜志，2006，16 （2）：216.
　　[2]化妝品安全技術規范2015版[S].北京：中華人民共和國國家食品藥品監督管理總局，2015.
　　[3]陳黎明，胡國勝，田玉平，朱錫菊，王虎.高效液相色譜法測定化妝品中6種四環素類抗生素[J].中日用化學工業，2010，40（1）：64-66.
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