益氣消癥法方藥治療冠心病的療效及其對ERK12信號轉導通路、Omentin-1的影響

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　　摘要 目的：探究益氣消癥法方藥治療冠心病的療效及其對ERK12信號轉導通路、Omentin-1的影響。方法：選取2017年3月至2018年3月鄭州大學附屬鄭州中心醫院收治的冠心病患者90例作為研究對象，按照隨機數表法隨機分為對照組和觀察組，每組45例，對照組使用氯吡格雷治療，觀察組在對照組基礎上聯合益氣消癥法方藥治療。比較2組患者的臨床療效。檢測并比較2組患者治療前后血清hs-CRP、TNF-α、和Omentin-1水平。并通過qRT-PCR反應檢測MEK和ERK mRNA的表達水平。結果：觀察組的有效率顯著高于對照組（P<0.05）。治療后2組心功能指標均得到顯著改善（P<0.05）;治療后觀察組的LVEF顯著高于對照組，LVEDD顯著低于對照組（均P<0.05）。治療后2組炎性反應因子均顯著降低，治療后觀察組hs-CRP、TNF-α顯著低于對照組（P<0.05）。治療前2組MEK和ERK水平差異無統計學意義（P>0.05），治療后均顯著降低（P<0.05），治療后觀察組MEK和ERK水平均顯著低于對照組（P<0.05）。術前2組Omentin-1水平差異無統計學意義（P>0.05），術后均顯著升高（均P<0.05），術后觀察組血清Omentin-1顯著高于對照組（P<0.05）。結論：益氣消癥法方藥對冠心病具有更好的臨床療效，并可上調血清Omentin-1水平，提高預后;進一步的研究顯示氣消癥法方藥可抑制MEK/ERK通路水平，降低炎性反應因子水平，可能是取得更好療效的作用機制。
　　關鍵詞 冠心病;益氣消癥法方藥;細胞外信號調節激酶;網膜素-1;信號轉導通路
　　Abstract Objective：To explore the therapeutic effects of Yiqi Xiaozheng method in the treatment of coronary heart disease and its effects on ERK12 signal transduction pathway and Omentin-1.Methods：A total of 90 patients with coronary heart disease treated in the Zhengzhou Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University from March 2017 to March 2018 were selected as the study object.They were randomly divided into the control group and the observation group according to the random number table method，with 45 cases in each group.The control group was treated with clopidogrel，and the observation group was prescribed medicine of Yiqi Xiaozheng method，on the basis of the treatment of the control group.The clinical effects of the 2 groups of patients were compared.Serum hs-CRP，TNF-α，and Omentin-1 levels were detected before and after the treatment of both groups.The expression levels of MEK and ERK mRNA were detected by qRT-PCR reaction.Results：The effective rate of the observation group was significantly higher than that of the control group（P<0.05）.After the treatment，the cardiac function indexes of both groups were significantly improved（P<0.05）.The LVEF of the observation group was significantly higher than that of the control group after treatment，and the LVEDD was significantly lower than that of the control group（P<0.05）.The inflammatory factors of the 2 groups were significantly decreased after treatment.The levels of hs-CRP and TNF-α in the observation group were significantly lower than those in the control group（P<0.05）.There was no statistical significance of the difference in MEK and ERK levels between the 2 groups before treatment（P>0.05）.After treatment，the levels of MEK and ERK in the observation group were significantly lower than those of the control group（P<0.05）.There was no significant difference in the levels of Omentin-1 between the 2 groups before treatment（P>0.05），while the level in both groups was significantly increased after the treatment（P<0.05）.The serum Omentin-1 level of the observation group after the treatment was significantly higher than that of the control group（P<0.05）.Conclusion：Yiqi Xiaozheng method has better clinical efficacy for coronary heart disease，and can up-regulate serum Omentin-1 level and improve prognosis.Further studies have shown that prescriptions of Yiqi Xiaozheng method can further inhibit the level of MEK/ERK pathways，and reduce the level of inflammatory factors，which may be related to better efficacy. 　　Key Words Coronary heart disease; Yiqi Xiaozheng prescription; ERK; Omentin-1; Signal transduction pathway
　　中圖分類號：R285.6文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.05.039
　　冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（Coronary Atherosclerotic Heart Disease），又稱冠心病。近年來冠心病的發病率逐年提高[1]。冠心病的病程長，需長時間治療，中藥因其具有較好的療效和較低的不良反應引起了更多的重視[2]。益氣消癥法方藥是一種常用的中藥方，具有消炎、抗凝等多種作用，在抑制子宮肌瘤血管新生和治療慢性阻塞性肺疾病中均有較好的效果，然而鮮有其治療冠心病的研究[3-4]。Ras/Raf/絲裂原活化蛋白激酶（MEK）/細胞外信號調節激酶（ERK）調節多種細胞過程，包括增殖、凋亡和轉移，最新的研究顯示冠心病的發生發展可能與ERK1/2有關[5]。網膜素-1（Omentin-1）作為一種新的脂肪因子，參與動脈粥樣硬化和冠心病的形成和發展[6]。本研究主要觀察益氣消癥法方藥對冠心病患者療效，并通過分析其對ERK1/2以及Omentin-1的影響探究其作用機制，為臨床更好地治療冠心病提供新思路。
　　1 資料與方法
　　1.1 一般資料 選取2017年3月至2018年3月鄭州大學附屬鄭州中心醫院收治的冠心病患者90例作為研究對象，其中男51例，女39例，年齡53～75歲。將以上患者按照隨機數表法分為對照組和觀察組，每組45例。對照組中男26例，女19例，年齡53～74歲，平均年齡（60.45±3.96）歲，病程3～27年，平均病程（18.34±3.98）年;觀察組中男25例，女20例，年齡54～75歲，平均年齡（61.41±4.01）歲，病程4～26年，平均病程（16.43±3.26）年。2組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本次研究已經獲得倫理委員會批準（倫理審批號：2017038）。
　　1.2 納入標準 1）年齡20～75歲;2）經冠脈造影檢查確診為冠心病[7];3）首次發病;4）資料完整;5）簽署知情同意書。
　　1.3 排除標準 1）在入組前確診為冠心病并接受過介入治療或藥物治療的患者;2）合并心力衰竭和急性心肌梗死;3）合并嚴重肝腎功能不全的患者;4）合并慢性阻塞性肺病或其他嚴重肺部疾病;5）合并其他部位感染或惡性腫瘤;6）心有臟移植或心臟外科手術史;7）對本次研究藥物過敏。
　　1.4 治療方法 2組患者均進行常規治療，包括擴血管、控制血壓、吸氧以及改善循環等。對照組在常規治療的基礎上使用氯吡格雷（賽諾菲杭州制藥有限公司，國藥準字J20130083）治療，口服，300 mg/次，1次/d;3～5 d后改為75 mg/次，1次/d。觀察組在對照組基礎上聯合益氣消癥法方藥治療，組方為：水蛭10 g、川芎10 g、黃芪30 g、赤芍10 g、紫菀10 g、廣地龍12 g、豬牙皂3 g，每日1劑，水煎400 mL，早晚分2次口服。2組均進行30 d的治療。
　　1.5 觀察指標
　　1.5.1 臨床療效 在治療后評價觀察組每位患者療效[6]。顯效：患者各項實驗室指標恢復正常，心絞痛、胸悶、心悸等臨床癥狀的發生減少80%以上;有效：患者各項實驗室指標基本恢復臨床癥狀發作次數減少50%以上;無效：各項臨床癥狀和實驗室指標無顯著改善。有效率=（顯效+有效）/總例數×100%。
　　1.5.2 心功能指標 分別在治療前和治療后進行左心室造影檢測患者心功能，將導管（4F，TERUMO，日本）置于左心室，取向為右前位30°，然后推射造影劑35 mL，速度12～15 mL/s，對左心室進行造影，檢測項目包括：左心室射血分數（Left Ventricular Ejection Fractions，LVEF）和左心室舒張末期內徑（LVEDD）。
　　1.5.3 血清炎性反應因子和Omentin-1 分別在治療前和治療后抽取患者清晨空腹外周靜脈血10 mL，其中2 mL使用全自動生化分析儀（日立，Hitachi 7180）檢測每份樣本中血清炎性反應因子水平，檢測內容包括超敏C反應蛋白（hs-CRP）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）;2 mL靜止后離心（3 000 r/min，10 min）收集血清，使用酶聯免疫法檢測血清Omentin-1水平，試劑盒購買于南京凱基生物科技有限公司，嚴格按照試劑盒說明書中的方法操作。
　　1.5.4 外周血ERK1/2水平 另5 mL離心取上層血清，使用全血RNA分離試劑盒分離全血RNA，然后通過qRT-PCR反應檢測MEK和ERK mRNA的表達水平。使用逆轉錄試劑盒（TaKaRa，Japan）對RNA樣品進行逆轉錄測定以合成cDNA。逆轉錄反應條件反應條件為37 ℃，反應15 min，逆轉錄酶失活條件為85 ℃，反應15 s。用SYBR Prellix Ex TaqTM實時PCR試劑盒（TaKaRa，Japan）進行RT-qPCR實驗。通過在95 ℃下激活DNA聚合酶5 min進行PCR，然后進行40個循環的兩步PCR（95 ℃10 s和60 ℃ 30 s），最終延伸75 ℃ 10 min，保持在4 ℃。所有引物均獲自Genewiz（中國江蘇蘇州）公司，使用2-△△CT法分析mRNA表達見表1。
　　1.6 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率（%）表示，采用秩和檢驗或2檢驗比較;計量資料以均數±標準差（±s）進行正態分布檢驗，組間兩兩比較使用t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。
　　2 結果 　　2.1 2組患者臨床療效比較 觀察組有效率顯著高于對照組，2組比較差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。
　　2.2 2組患者心功能指標比較 治療前2組的心功能指標比較，差異均無統計學意義（P>0.05），治療后觀察組LVEF均顯著高于對照組（P<0.05），LVEDD顯著低于對照組（P<0.05）。見表3。
　　2.3 2組患者炎性反應因子水平比較 治療前2組炎性反應因子差異無統計學意義（P>0.05），治療后觀察hs-CRP、TNF-α均顯著低于對照組（均P<0.05）。見表4。
　　2.4 2組患者血清Omentin-1比較 術前2組Omentin-1水平差異無統計學意義（P>0.05），術后觀察組血清Omentin-1顯著高于對照組（均P<0.05）。見表5。
　　2.5 2組患者MEK和ERK水平比較 治療前2組MEK和ERK水平差異無統計學意義（P>0.05），治療后觀察組MEK和ERK水平均顯著低于對照組（均P<0.05）。見表6。
　　3 討論
　　隨著人口老齡化的加劇和人們生活水平的提高，我國冠心病的發病率呈現逐年升高的趨勢。冠心病的基本發病機理為動脈粥樣硬化，是由血小板聚集引起脂類等沉積在動脈內膜，引起的動脈堵塞和心臟缺血[8]。抗血小板藥物是治療冠心病的主要方法，但常用的抗血小板藥物如阿司匹林等療效欠佳，并且易出現不良反應。又由于冠心病病程較長，需要長期服用藥物，對于藥物不良反應的問題也越來越收到重視，因此，研究新的具有良好效果方法在臨床具有重大意義。
　　臨床研究發現使用氯吡格雷的預后具有一定的差異，仍有一部分患者不會從中獲益[9]。益氣消癥法方藥具有改善血管生成的作用，其中的水蛭具有抗凝以及溶解血栓的作用，從而改善冠狀動脈的血液循環[10]。本次研究結果顯示觀察組的有效率顯著高于對照組;治療前2組的心功能指標均無統計學意義，治療后均得到顯著的改善，治療后觀察組LVEF均顯著高于對照組，LVEDD顯著低于對照組。益氣消癥法方藥中的水蛭中含有水蛭素，是一種抗凝化瘀藥物，在治療治心腦血管疾病中可以改善血液循環，具有較好的療效。而高的氧化應激水平和炎性反應水平也是引起動脈粥樣硬化發生的重要機制，益氣消癥法方藥中的川芎、黃芪、紫菀等中含有的活性物質具有抗炎、抗氧化的作用，從而降低氧化應激水平并抑制炎性反應因子的表達，從而降低動脈粥樣硬化發生的概率，對于冠心病的治療具有更好的效果[11-12]，提示益氣消癥法方藥的使用可進一步提高冠心病的臨床療效。
　　Omentin-1是近年來新發現的一種脂肪因子，具有調節和保護代謝、抑制炎性反應和抗氧化的作用，從而參與動脈粥樣硬化和冠心病的形成和發展[13]。本次研究結果顯示術后2組Omentin-1水平均顯著升高，且術后觀察組血清Omentin-1顯著高于對照組。過往研究結果顯示低水平的Omentin-1是冠心病的獨立危險因素[14]。Nazar等的研究也顯示臨床療效更佳的冠心病患者血清Omentin-1水平顯著升高[15]。此外，也有研究認為血清Omentin-1可作為判斷冠心病預后的血清因子[16]，提示使用益氣消癥法方藥聯合治療冠心病具有更好的預后。
　　MEK/ERK信號通路在細胞的生長、增殖、凋亡等多種細胞過程中發揮著重要作用，幾年來研究顯示由于心肌缺血引起的氧化應激激活會激活MEK/ERK通路[17]。有研究顯示MEK和ERK在正常心肌細胞中低表達，而冠心病患者心肌細胞中MEK和ERK水平顯著高于非冠心病患者[18]。本次研究結果顯示治療前2組炎性反應因子差異無統計學意義，治療后均顯著降低（P<0.05），治療后觀察hs-CRP、TNF-α均顯著低于對照組。治療前2組MEK和ERK水平無統計學意義（P>0.05），治療后均顯著降低，治療后觀察組MEK和ERK水平均顯著低于對照組。過往也有研究顯示血清中的MEK和ERK水平與冠心病患者的病情嚴重程度呈現正相關關系[19]。而MEK/ERK通路的激活可激活炎性反應，促進TNF-α以及白細胞介素等的合成和分泌，參與動脈粥樣硬化和冠心病的發生和發展[20]。近年來有研究顯示益氣消癥法方藥具有改善微血管新生和血液循環的作用[21]。Parthasarathy等的研究也顯示通過抑制MEK/ERK通路可以抑制炎性反應[22]，Zhang等的研究結果也顯示下調MEK/ERK水平可以通過抑制炎性反應改善血管上皮細胞功能從而治療冠心病[23]，提示益氣消癥法方藥可通過抑制MEK/ERK通路下調炎性反應因子的水平，這可能是治療冠心病的作用機制。
　　綜上所述，益氣消癥法方藥對冠心病具有更好的臨床療效，并可上調血清Omentin-1水平，提高預后。進一步的研究顯示氣消癥法方藥可進一步的抑制MEK/ERK通路的水平，降低炎性反應因子水平，可能與更好的療效有關。但是關于益氣消癥法方藥治療冠心病的長期療效和安全性還需要進一步研究。
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　　（2018-10-12收稿 責任編輯：芮莉莉）
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