CD44v4在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其與浸潤轉移的關系
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摘要：目的 探討CD44v4在浸潤性乳腺導管癌中的表達及其與浸潤轉移的關系。方法 選取2011年1月～2018年3月我院收治的乳腺浸潤性導管癌185例設為觀察組，另選取同期收治的乳腺良性疾病患者60例設為對照組，采用免疫組化法檢測兩組CD44v4的表達情況，并比較觀察組CD44v4表達及臨床病理因素情況。結果 觀察組CD44v4陽性表達率為60.54%，高于對照組的5.00%，差異有統計學意義（P<0.05）。CD44v4表達在不同年齡、絕經前后月經狀況、原發瘤大小間比較，差異無統計學意義（P>0.05）;不同TNM分期、組織學分級、淋巴結轉移患者的CD44v4表達比較，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 CD44v4蛋白在乳腺浸潤性導管癌患者中為高表達，檢測其表達可作為判斷腫瘤預后的新指標。
關鍵詞：浸潤性乳腺癌;CD44v4;浸潤轉移
中圖分類號：R737.9 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.11.025
文章編號：1006-1959（2019）11-0095-03
Abstract：Objective To investigate the expression of CD44v4 in breast invasive ductal carcinoma and its relationship with invasion and metastasis.Methods A total of 185 patients breast invasive ductal carcinoma as observation group， and 60 patients with benign breast diseasea as control group， were admitted to our hospital from January 2011 to March 2018. The immunohistochemical method was used to detect the expression of CD44v4 between two groups， and the correlation between the CD44v4 expression and clinicopathologic factors of observation group was analyzed.Results The positive rate of CD44v4 expression was 60.54%，which was higher than that 5.00% of control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant among different age， pre- and postmenopausal， different size of primary tumors with CD44v4 expression in observation group（P>0.05）; there was statistically significant between CD44v4 expression and patients in different TNM stage， histological grade and lymph node metastasis（P<0.05）.Conclusion CD44v4 is highly expressed in breast invasive ductal carcinoma patients， and it can be used as a new marker to judge the prognosis of breast cancer.
Key words：Breast invasive ductal carcinoma;CD44v4;Invasion and metastasis
乳腺癌（breast cancer）是我國女性常見惡性腫瘤，上世紀90年代以來，中國乳腺癌發病率的增長速度是全球的2倍[1]。乳腺癌死亡的主要原因是腫瘤轉移[2]。CD44v4是細胞黏附分子CD44家族中的一種變異體，目前發現在胃癌，膀胱癌等腫瘤中有表達，且與腫瘤的浸潤、轉移存在相關性[3-5]，但其在乳腺癌中的研究則較少報道。本研究主要探討CD44v4在浸潤性乳腺癌組織中的表達及其與浸潤轉移的關系，現報道如下。
1資料與方法
1.1一般資料 選取2011年1月～2018年3月柳州市柳鐵中心醫院收治的經病理確診的乳腺浸潤性導管癌患者185例設為觀察組，均為女性，年齡29～73歲，中位年齡53歲。另選取同期乳腺良性疾病患者60例設為對照組，均為女性，年齡21～68歲，中位年齡43歲。兩組年齡比較，差異無統計學意義（P>0.05），可比較。本研究經醫院倫理委員會審批通過。 1.2方法 兩組均采用免疫組化法[6]檢測CD44v4的表達情況。石蠟切片常規脫蠟水化后，用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗，3次×3 min，然后進行組織修復。每張切片加1滴或50 μl的3%H2O2，室溫下孵育10 min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗，3次×3 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl的一抗（CD44v4），4℃過夜，PBS沖洗，3次×5 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl放大劑（試劑A），室溫下孵育10 min，PBS沖洗，3次×3 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl多聚酶結合物（試劑B），室溫下孵育10 min，PBS沖洗，3次×3 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察3～5 min。自來水沖洗，蘇木素復染，用0.1% HCl分化，自來水沖洗，PBS返藍。DAB顯色，切片經梯度酒精脫水干燥（二甲苯透明），中性樹膠封固。用PBS代替一抗作為陰性對照，用正常乳腺導管上皮組織做陽性對照。CD44v4單克隆抗體購自福州邁新生物技術有限公司。
1.3結果判斷 CD44v4以包膜著色為主，可有少量胞漿著色，結果判定根據陽性細胞的數量和染色深度綜合判斷，陽性結果呈棕黃色顆粒[7]。從每例標本的石蠟切片中隨機取5張切片進行免疫組織化學染色。每個標本在顯微鏡下隨機選取不重疊的10個高倍視野的陽性細胞進行計數，每張切片由2人觀測。按陽性細胞占總細胞數的百分比評分：0分為陰性，陽性細胞數≤5%;1分為陽性，細胞數5%～25%;2分為陽性，細胞數25%～75%;3分為陽性，細胞>75%。按著色強度評分：0分為無著色，1分為淺黃色，2分為黃色，3分為棕黃色，取兩項評分的乘積作為總積分，≤1分為陰性，>1分為陽性。
1.4觀察指標 比較兩組CD44v4表達率，以及觀察組乳腺浸潤性導管癌患者CD44v4表達與臨床病理。
1.5統計學方法 采用SPSS 16.0統計學軟件進行數據分析。計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗;計數資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗。以P<0.05表示差異有統計學意義。
2結果
2.1兩組CD44v4表達率比較 觀察組CD44v4陽性表達率為60.54%（112/185），高于對照組的5.00%（3/60），差異有統計學意義（？字2=43.05，P<0.05），見圖1。
2.2觀察組CD44v4表達與臨床病理參數比較 觀察組185例乳腺浸潤性導管癌患者中，CD44v4陽性表達112例（60.54%），陰性表達73例（39.46%）。CD44v4表達在不同年齡、絕經前后月經狀況、原發瘤大小間比較，差異無統計學意義（P>0.05）;不同TNM分期、組織學分級、淋巴結轉移患者的CD44v4表達，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。
3討論
CD44v4是細胞粘附因子CD44變異體的一員，參與細胞-細胞、細胞-胞外基質之間的特異性黏附，在食管癌、胃癌、肝癌、頭頸部腫瘤等腫瘤細胞中均有陽性表達，是參與腫瘤生長，分化和血道淋巴道轉移的重要因子[5，8-10]，其在乳腺癌的復發轉移中也發揮著重要作用[11]。有研究證實，腫瘤浸潤轉移過程中的一個關鍵步驟就是脫落的腫瘤細胞穿過血管內皮進而遷移，在這個過程中，內皮細胞E-選擇素起著舉足輕重的作用[12]，CD44v4則是介導乳腺癌細胞跨內皮轉移的一個主要的E-選擇素配體[13]。乳腺癌脫落細胞上的選擇素配體CD44v4與血管內皮細胞上表達的E選擇素結合，介導粘附過程[11]。但CD44v4的陽性表達與乳腺癌腫瘤的大小、分級及淋巴結轉移等臨床病理參數的相關性目前尚不明確。
本研究結果顯示，觀察組CD44v4陽性表達率為60.54%（112/185），高于對照組的5.00%（3/60），差異有統計學意義（P<0.05），說明乳腺癌組織中CD44v4濃度高于臨近的非癌組織，在乳腺癌組織中有陽性高表達。CD44v4表達在不同年齡、絕經前后月經狀況、原發瘤大小比較，差異無統計學意義（P>0.05）;CD44v4表達在不同TNM分期、不同組織學分級、淋巴結轉移患者中比較，差異有統計學意義（P<0.05），說明TNM分期、病理組織學分級、淋巴結轉移參與乳腺癌的惡性進展，增強了乳腺癌腫瘤細胞的侵襲性。因此，通過研究CD44v4在乳腺癌發生發展中的作用，對判斷腫瘤的生物學特性和預后均具有重要意義。
綜上所述，CD44v4蛋白在乳腺浸潤性導管癌患者中為高表達，檢測其表達可作為判斷腫瘤預后的新指標。
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收稿日期：2019-3-12;修回日期：2019-3-22
編輯/杜帆
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