蝸牛藥材質量標準提升研究
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【摘要】目的：建立鑒別、檢查、含量測定方法，完善蝸牛質量控制方法。方法：參照2015年版《中華人民共和國藥典》附錄相關方法進行鑒別檢查及對重金屬酸不溶性限度;采用乙二胺四醋酸二鈉配位滴定法對其碳酸鈣（CaCO3）的含量進行測定。結果：碳酸鈣回歸方程為y=197.53x+0.4664，r=0.9999，表明碳酸鈣的取樣量在0.1～0.2g范圍內，與乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05mol/L）的消耗體積具有良好的線性關系。平均回收率為100.51%，RSD為0.20%（n=9）。測定結果為7批蝸牛碳酸鈣的平均百分含量為92.07%，總灰分為96.73%，酸不溶灰分為7.51%。結論：該實驗所采用的測定方法結果準確、可靠，可用于樣品測定，可用于蝸牛的質量控制。
【關鍵詞】蝸牛;鑒別;檢查;含量測定;配位滴定法
【中圖分類號】R282【文獻標志碼】A【文章編號】1007-8517（2019）1-0039-06
Abstract：ObjectiveToestablishanidentification，inspectionandcontentdeterminationmethodandimprovethequalitycontrolmethodofsnails.MethodsThecontentofcalciumcarbonate（CaCO3）wasdeterminedbycoordinationtitrationwithEDTA.GeneralinspectionandinsolublelimitofheavymetalacidwasdeterminedbyChinesePharmacopoeia2015edition.ResultsTheregressionequationofcalciumcarbonateisy=197.53x+0.4664，r=0.9999，whichindicatesthatthesampledamountofcalciumcarbonateisintherangeof0.1～0.2g，andthedisodiumedetate（0.05mol/L）Theconsumptionvolumehasagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas100.51%，RSD=0.20%（n=9）.Theresultsshowedthattheaveragepercentageofcalciumcarbonatein7batchesofsnailswas92.07%，thetotalashcontentwas96.73%，andtheacidinsolubleashcontentwas7.51%.ConclusionTheresultsoftheassayusedinthisexperimentareaccurateandreliable.heycanbeusedforsampledeterminationandcanbeusedforqualitycontrolofsnails.
Keywords：Snial;Identification;Inspection;ContentDetermination;CoordinationTitration
蝸牛為巴蝸牛科動物同型巴蝸牛BradybaenasimiLarisFerussac的貝殼。夏、秋二季捕捉，置沸水中略煮，去肉，洗凈，曬干。蝸牛，蒙古文名音譯“布熱-好日?！盵1]，別名音譯“東日阿”?！稛o誤蒙藥鑒》記：“‘東日阿’…《晶鬘》中云：‘從狀如盾、扁而旋繞的殼中出，硬殼馱于背后。尿液中炮制用?！薄夺t典》中云：‘蝸牛殺蟲，利水腫’”[2]。蒙古文別名“東日阿”意譯為像似海螺，系前人依據動物形狀命名。性咸、涼，味甘。具有消水腫，利尿，殺蟲，清瘟疫功效。用于水腫，腎熱，膀胱熱，尿閉，尿路結石，協日疫，黃水瘡，腸寄生蟲。本品1986年載入《內蒙古蒙藥材標準》[1]，該標準僅就其【性狀】做了規定外，缺少其它有效的質量控制方法及指標。通過實驗研究，為蝸牛建立穩定、可靠、準確的檢查、含量測定方法，填補該藥材質量標準項下空白項。合理控制質量，保證其用藥安全及療效提供可靠的依據。
1實驗材料
1.1藥材蝸牛來源：X1（批號：160626，河北安國）;X2（批號：20161106，山東）;X3（批號：170101，廣西）;X4（批號：170102，安徽）;X5（批號：20170208，山東）;X6（批號：20170307，河北保定）;X7（批號：20170219，湖南），經鑒定為同型巴蝸BradybaenasimiLarisFerussac的貝殼。見圖1。
1.2儀器滴定管（50mL），磁力攪拌器，BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司），T-1200N型馬弗爐（鄭州天縱），DL-1型電爐（北京市永光明醫療儀器有限公司）。
1.3試藥乙二胺四醋酸二鈉;碳酸鈣;鹽酸;氫氧化鉀;氨溶液;氯化銨以上均為分析純;基準氧化鋅;甲基紅;鈣黃綠素;鉻黑T。
2方法與結果
2.1鑒別本品屬動物殼類藥材，主含碳酸鈣。故照《中國藥典》2015年版四部（通則0301）[3]相關方法對其進行了一般鑒別試驗。
2.1.1鈣鹽鑒別取鉑絲用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯磚紅色。結果見圖2，7批藥材鈣鹽的火焰鑒別反應，均呈陽性。
2.1.2沉淀鑒別取本品粉末0.5g，加稀鹽酸5mL，即產生大量氣泡，濾過，濾液加甲基紅指示液2滴，用氨試液中和，再滴加鹽酸至恰呈酸性，加草酸銨試液，即生成白色沉淀;分離，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀鹽酸。結果見圖3～7。7批藥材鈣鹽的沉淀鑒別反應，均呈陽性。 2.1.3碳酸鹽鑒別取本品粉末0.5g，加稀鹽酸5mL即泡沸，產生二氧化碳氣體，導入氫氧化鈣試液5mL中，即生成白色沉淀。結果見圖8，7批藥材的碳酸鹽鑒別反應，均呈陽性。
2.2灰分檢查照《中國藥典》2015年版四部（通則2302）[3]灰分測定法，對7批樣品的總灰分及酸不溶性灰分進行了考察測定。
2.2.1總灰分測定取供試品2g，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（精準至0.01g），緩緩熾熱，至完全碳化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據殘渣重量，計算供試品總灰分的含量（%）。結果見表3。本品含碳酸鈣達90%以上，此熾灼條件下不分解，故測定結果減失重量均較少。該項檢查不收入標準草案正文。
2.2.2酸不溶性灰分測定取上項所得的灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約20mL、用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10min，表面皿用熱水5mL沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內的殘渣用水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應為止。濾渣連同濾紙移同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據殘渣重量，計算供試品酸不溶性灰分的含量（%）。注意避免燃燒。結果見表1。本品殼內易聚集泥沙，影響藥材質量，故應控制其酸不溶性灰分。蝸牛酸不溶性灰分測定結果表明，7批樣品中酸不溶性灰分平均值為7.51%，6批樣品酸不溶性灰分均低于9.0%，測定值中僅有一例大于9.0%，故本品酸不溶性灰分不得過9.0%。
2.3重金屬照重金屬檢查法《中國藥典》2015年版四部（通則0821第一法）[3]對本品進行了檢查。
2.3.1標準鉛溶液的制備稱取硝酸鉛0.1599g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL與水50mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液10mL，置100mL量瓶中加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當于10μg的Pb）。本液現用現配。
2.3.2供試品溶液的制備取本品0.50g，2份，分別置25mL納氏比色管中，一份（乙管）加水5mL，混合均勻，加稀鹽酸4mL，煮沸5min，放冷，濾過，濾器用少量水洗滌，合并洗液與濾液，加酚酞指示液1滴，并滴加適量的氨試液至溶液顯淡紅色，加稀醋酸2mL與水制成25mL，加維生素C0.5g，溶解后既得;另一份（丙管）加水5mL，混合均勻，加稀鹽酸4mL，煮沸5min，放冷，濾過，濾器用少量水洗滌，合并洗液與濾液，加酚酞指示液1滴，并滴加適量的氨試液至溶液顯淡紅色，加稀醋酸2mL，標準鉛溶液2.00mL（20ug）與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2mL后，加水制成25mL，加維生素C0.5g，溶解后既得。
2.3.3檢查方法取25mL納氏比色管一支（甲管），加標準鉛溶液2mL與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2mL后，加水稀釋成25mL，加維生素C0.5g。作為對照品溶液。取甲管對照品溶液與供試品溶液乙管，丙管，分別加硫代乙酰胺試液各2mL，搖勻，放置2min，照《中國藥典》2015年版四部（通則0821第一法）[4]依法操作，比較檢查，結果見表2。7批供試品溶液的顏色都淺于10μg標準鉛溶液的顏色，重金屬含量均少于百萬分之二十。本品重金屬含量不過20mg/kg。
2.4含量測定
2.4.1滴定液的制備取乙二胺四醋酸二鈉19g，加適量的水使溶解成1000mL，搖勻。取于約800℃灼燒至恒重的基準氧化鋅0.1220g，精密稱定，加稀鹽酸3mL使溶解，加水25mL，加0.025%甲基紅的乙醇溶液1滴，滴加氨試液至溶液顯微黃色，加水25mL與氨-氯化銨緩沖液（pH10.0）10mL，再加鉻黑T指示劑少量，用本液滴定至溶液由紫色變為純藍色，并將滴定的結果用空白試驗校正（空白消耗量為0.05mL）。每1mL乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05moL/L）相當于4.069mg的氧化鋅。根據本液的消耗量與氧化鋅的取用量，算出本液的濃度，即得。本試驗用乙二胺四醋酸二鈉滴定液的濃度為0.0501moL/L。其校正因子F為1.002。
2.4.2測定方法取本品細粉約0.15g，精密稱定，置錐形瓶中，加稀鹽酸10mL，加熱使溶解，加水20mL與甲基紅指示液1滴，滴加10%氫氧化鉀溶液至溶液顯黃色，繼續多加10mL，加鈣黃綠素指示劑少量，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05moL/L）滴定至溶液黃綠色熒光消失而顯橙色。每1mL乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05moL/L）相當于5.004mg的碳酸鈣（CaCO3）。
2.4.3線性與范圍取碳酸鈣0.100g、0.125g、0.150g、0.175g、0.200g，精密稱定，分別置錐形瓶中，照“2.4.2測定方法”項下方法，自“加稀鹽酸10mL”起依法操作，以樣品量（x）對乙二胺四醋酸二鈉滴定液（EDTA0.05moL/L）的消耗體積（y）進行線性回歸，得標準曲線回歸方程為：y=197.53x+0.4664，相關系數r=0.9999。表明碳酸鈣的取樣量在0.1～0.2g范圍內，與乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05moL/L）的消耗體積具有良好的線性關系。
2.4.4精密度試驗取碳酸鈣0.15g，精密稱定，置錐形瓶中，照“2.4.2測定方法”項下方法，自“加稀鹽酸10mL”起依法操作，連續測定6次，并計算含碳酸鈣測得率。碳酸鈣的測得率為100.92%，RSD為0.18%。結果表明該試驗精密度良好。
2.4.5穩定性試驗精密稱取樣品X4（批號170102）0.15g，照“2.4.2測定方法”分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h時間段依法測定，其結果平均含量為91.36%、RSD為0.21%。表明該方法穩定性良好。 2.4.6重復性試驗稱取樣品X4（安徽，批號170102）0.15g，6份，精密稱定，分別照“2.4.2測定方法”依法測定，其結果重復性良好，平均含量為92.22%、RSD為0.16%。
2.4.7回收率試驗取已知含量的樣品X4（安徽，批號170102）0.075g，9份，精密稱定，各置錐形瓶中，分三組按標準品加入量-樣品中含量0.5∶1、1∶1、1.5∶1的要求分別依次精密加入碳酸鈣，照“2.4.2測定方法”項下方法，自“加稀鹽酸10mL”起依法操作，平行測定3次，其CaCO3的總平均回收率為100.51%、RSD為0.20%。結果見表3。
2.4.8樣品測定取蝸牛樣品細粉0.15g，精密稱定，各置錐形瓶中，照“2.4.2測定方法”，自“加稀鹽酸10mL”起依法操作，測定并計算含量。蝸牛平均含量為92.07%，RSD為0.31%。結果見表4。
3討論
蝸牛主含碳酸鈣，所以參照《中國藥典》2015年版一部載石決明【含量測定】項下方法，研究建立了采用乙二胺四醋酸二鈉配位滴定法對其碳酸鈣（CaCO3）含量進行測定的方法。
蝸牛7批樣品碳酸鈣的平均含量約為92.07%，其含量范圍為91.69%～92.45%，各批間含量較接近（RSD=0.31%）。故取其下限，暫定蝸牛含碳酸鈣（CaCO3）不得少于90.0%。
制蝸牛7批樣品碳酸鈣的平均含量約為95.44%，其含量范圍為95.04%～95.84%。各批間含量較接近（RSD=0.40%）。故取其下限，暫定制蝸牛含碳酸鈣（CaCO3）不得少于94.0%。
參考文獻
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[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：137.
[4]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準（蒙藥分冊）[S].北京：人民衛生出版社，1998.
（收稿日期：2018-10-31編輯：劉斌）
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