廣東省15個不同產地五指毛桃藥材中補骨脂素含量測定
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摘 要：目的 建立五指毛桃藥材中補骨脂素的高效液相色譜測定方法，測定廣東省15個不同產地五指毛桃藥材中補骨脂素含量，了解廣東省不同產地五指毛桃藥材質量情況。方法 采用反相高效液相色譜法測定補骨脂素的含量，Waters C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相：甲醇-水（60∶40），流速為1.0mL/min，柱溫：35℃;檢測波長：245nm。結果 補骨脂素在9.4～198.5?g/mL范圍內，線性關系良好，平均回收率為99.94%，RSD為0.64%。廣東省不同產地五指毛桃的補骨脂素含量范圍為0.165～1.187mg/g，說明廣東省不同產地五指毛桃質量較好。結論 五指毛桃藥材中補骨脂素的HPLC分析方法結果準確，重現性好，可作為五指毛桃藥材的質量評價方法。
關鍵詞：五指毛桃 補骨脂素 含量測定
中圖分類號：R282.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2019）02（c）-0201-02
五指毛桃為嶺南常用草藥、煲湯材料，俗稱牛奶木、五指龍、土黃芪，以?？崎艑僦参锎秩~榕（Ficus hirta Vahl）的根入藥，性平，味甘、辛，具有益氣健脾、祛痰化濕、舒筋活絡的作用，用于肺虛痰喘、脾胃氣虛、肢倦無力[1]，主要分布于廣東、廣西、福建、海南、貴州、云南等地，以廣東河源人工種植面積最廣，其中河源已經建立起多個五指毛桃的GAP種植基地，為五指毛桃的規范化種植提供了技術支持。研究表明，五指毛桃主要含有香豆素類[2]、黃酮類[2]、甾體及其他揮發性成分，其中，補骨脂素、佛手內酯在不同產地、不同采收年份、不同采收季節、不同農家類型品種的五指毛桃含量顯著較高，可作為五指毛桃內在質量評價和鑒定的依據[3-4]。五指毛桃的質量標準目前收載于《廣東省中藥材標準 第一冊》（2004年版）第35頁、《廣西壯藥品種質量標準（第二卷）》第47頁、《湖南省中藥材標準（2009年版）》，只有《廣西壯藥品種質量標準》對五指毛桃做出了補骨脂素的含量測定要求，但其流動相使用了乙腈，毒性較大，成本較高。根據五指毛桃化學成分與藥理作用研究，發現補骨脂素是其主要活性成分之一，具有抗菌[5]、鎮咳平喘[5]、抗炎鎮痛[5]、對急性肝損傷的保護[6-7]、免疫調節[8]等作用。為了分析和評價廣東省不同地區五指毛桃的質量，該研究采用高效液相色譜法分別對廣東省15個不同地區五指毛桃中補骨脂素的含量進行檢測，為制定五指毛桃質量標準提供依據。
1 儀器與試藥
戴安U3000高效液相色譜儀;電子分析天平（梅特勒-托利多）;密理博milli-Q Direct 8 純水儀（美國Millipore公司）;超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;粉碎機（泓荃制藥機械公司）;甲醇（色譜純），補骨脂素對照品購于中國食品藥品檢定研究院，五指毛桃藥材采收于廣東省15個不同地區（見表1）。
2 方法與結果
?。?）色譜條件。Waters C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相：水-甲醇（40：60），流速為1.0mL/min，進樣體積為10μL，柱溫：35℃;檢測波長：245nm。
?。?）對照品溶液的制備。精密稱取補骨脂素對照品適量，加甲醇制成每1mL含50.2?g/mL的溶液即得。
（3）供試品溶液的制備。取五指毛桃粗粉0.5g，精密稱定，置于50mL具塞錐形瓶中，精密加入10mL甲醇，稱定質量，超聲（功率100W，頻率40kHz）提取30min，冷卻至室溫后用甲醇補足失質量，搖勻，經0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。
（4）線性關系考察。分別精密稱取補骨脂素對照品適量，加甲醇制成濃度為9.4μg/mL、24.6μg/mL、50.2
μg/mL、100.1μg/mL、198.5μg/mL的溶液，分別10μL，按“（1）”項下色譜條件測定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標，以濃度（X）為橫坐標，進行線性回歸，得補骨脂素標準品回歸方程為Y=0.838X+0.116，R2=0.999;線性范圍為9.4～198.5μg/mL。
?。?）精密度試驗。取“（2）”項下對照品溶液10μL，注入液相色譜儀中，測定峰面積，重復測定6次，峰面積分別為42.159、43.106、42.841、41.984、42.562、42.618，RSD為0.98%，表明儀器的精密度良好。
（6）穩定性試驗。取第8號樣品，按“（3）”項下方法制備供試品溶液，按“（1）”項下色譜條件，分別于0、1、2、3、8、12、24h時測定峰面積，為49.203、50.541、49.956、50.025、50.952、49.991、50.124，RSD為1.08%，結果表明補骨脂素在24h內測定，穩定性良好。
?。?）重復性試驗。取第8號樣品6份，按“（3）”項下方法制備供試品溶液，按“（1）”項下色譜條件進行測定，峰面積為49.203、49.985、50.125、50.518、49.251、50.458，RSD為1.15%，表明該方法重復性良好。
（8）加樣回收試驗。取已測定補骨脂素含量的第8號五指毛桃樣品9份，每份0.3g，其中3份分別精密加入“（2）”項下對照品溶液5mL，另外3份分別精密加入“（2）”項下對照品溶液8mL，剩下3份分別精密加入“（2）”項下對照品溶液10mL，按“（3）”項下方法制備供試品溶液，按“（1）”項下色譜條件，進行測定，分別計算低、中、高濃度組樣品的加樣回收率和RSD。結果顯示，低濃度組平均加樣回收率為100.09%，RSD為1.19%;中濃度組平均加樣回收率為99.88%，RSD為0.50%;高濃度組平均加樣回收率為99.85%，RSD為0.22%，這說明了此方法中補骨脂素的加樣回收率良好。
?。?）樣品測定。分別取五指毛桃粗粉，按“（3）”項下方法每批樣品平行制備供試品溶液2份，按“（1）”項下色譜條件進行測定，利用“（4）”項下建立的標準曲線，計算五指毛桃樣品中補骨脂素的含量，結果見表1。
3 結論
補骨脂素是五指毛桃的主要活性成分之一，具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制腫瘤、免疫調節等作用，該研究發現補骨脂素在五指毛桃中含量較高，穩定性好，可作為制定五指毛桃質量標準的指標性成分。五指毛桃藥材中補骨脂素的HPLC分析方法結果準確，重現性好，可作為五指毛桃藥材的質量評價方法。
4 討論
該研究測定了廣東省15個不同地區五指毛桃中補骨脂素的含量，發現不同地區的五指毛桃中的補骨脂素含量差別較大，在制定其質量標準時，應加大樣本量進行研究，并進一步研究不同生長時期對補骨脂素含量的影響。
參考文獻
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