黑冰片及其成藥中重金屬和砷的含量測定

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　　【摘 要】 目的：建立黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸中重金屬鉛、鎘、銅、汞及砷的含量測定方法。方法：樣品經微波消解處理后，以電感耦合等離子體質譜儀測定砷、鉛、鎘、銅元素的含量，原子熒光光度計測定汞元素含量。結果：該檢測方法的回收率在84.87%～98.86%之間，RSD<5 %，測得黑冰片和兩種成藥中重金屬及有害元素總含量在17.65～77.82mg/kg之間。結論：參考《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》規定，黑冰片及其成藥中四種重金屬及砷均存在超標現象。該檢測方法具有較好精密度、重復性，可為黑冰片及其成藥的質量標準研究和臨床用藥安全提供科學依據。
　　【關鍵詞】 黑冰片;黑冰片-10味散;十味黑冰片丸;微波消解;含量測定
　　【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）3-0017-04
　　Abstract：Objective To establishthe determination method of the contents of heavy metal （Pb， Cd， Cu， Hg） and harmful element （As） in Heibingpian， heibingpian-10 wei pulvis， shiwei heibingpian pills. Method The samples were treated by microwave digestion， then the contents of Pb， Cd， Cu， As were determined by inductively coupled plasma mass spectrometry， the content of Hg was determined by atomic fluorescence spectrophotometer. Result The recovery rate of the methods were between 84.87%～98.86%， RSD<5%， The heavy metal andarsenic of contents of heibingpian and its preparations ranged from 17.648 to 77.820mg/kg. Conclusion Based to 《The Professional Import and Export Stands for Medicinal Herbs and Preparations》， the contents of Pb， Cd， Cu， Hg， As in Heibingpian and its preparations are overweighted. Totally， the methods are precise， repeatable， and suitable for the quality control of heibingpian and its preparation.
　　Keywords：Heibingpian; Heibingpian-10 wei pulvis; Shiwei Heibingpian Pills; Microwave Digestion; Content Determination
　　黑冰片為豬科動物野豬Sus Scrofa Linnaeus 的干燥糞便，顏色烏黑發亮，質地松脆，氣微，味辛澀苦，有健胃、消食、平息“希日”的功效，用于治療消化不良，寒性膽病及其引起的胃脘腫痛、黃疸、瘟疫等病癥，最早載于《四部醫典》[1]，現被《中國民族藥辭典》[2]收錄。黑冰片在中醫、蒙醫和藏醫中廣泛使用，蒙醫代表方黑冰片-10味散（含黑冰片22.8%），蒙名哈日—嘎布日-10，由黑冰片、木鱉子、金訶子、止瀉子等配方而成，具有抑赫依、希拉、助消化的功效，主治消化不良、口苦、噯氣、胃脹痛等病癥[3];藏醫代表方有十味黑冰片丸（含黑冰片27.45%），藏藥名為卡那久巴日布，由黑冰片、蓽茇、波棱瓜子、熊膽等十味藥組成，具有溫胃消食、破積利膽的功效，用于龍病、食積不化、惡心、培根痞瘤、膽囊炎、膽結石、寒性膽病及黃疸等的治療[4]。
　　目前黑冰片及其成藥的各項質量控制標準正在探索之中，并建立了一些質量控制方法，如利用分光光度計測定黑冰片吸附檸檬黃的吸收度以評價其吸附性能[5]，并對黑冰片中鐵、鉛等無機元素進行測定[6-7]，采用高效液相色譜法測定十味黑冰片丸中重要活性成分沒食子酸[8]、桂皮醛[9]等以控制其質量。但尚無對黑冰片及其成藥中各種重金屬和有害元素砷的含量進行研究?，F代研究證明，鉛、鎘、銅、汞、砷五種元素的積蓄性中毒會引起人體內各系統功能失調[10]。作為臨床常用藥，黑冰片及其成藥的重金屬及有害元素含量測定的研究迫在眉睫。本試驗采用微波消解法對采集到的黑冰片及其自制成藥樣品進行前處理，以電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）法測定鉛、鎘、銅、砷元素的含量，原子熒光光度法測定汞元素含量。為相關藥材飲片及其成藥的制備工藝和安全性評價提供科學依據。
　　1 材料與儀器
　　1.1 材料 超純水（電導率為18.25MΩ.cm）、過氧化氫溶液（成都金山化學試劑有限公司，分析純級）、硝酸溶液（成都金山化學試劑有限公司，優級純）。鎘、銅、鉛、汞、砷、鉍、鍺、銦標準溶液均購自山東省冶金科學研究院標準樣品研究院。試驗所用黑冰片飲片樣品來源于西藏拉薩，成藥則是按照文獻處方制劑而成，處方中其它飲片均購于九洲大藥房。
　　1.2 儀器 AL104電子天平（Mettler-Toledo），DHG-9240A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司），WP-UPT-10超純水機（四川沃特爾水處理設備有限公司），PF6-2非色散原子熒光光度計（北京普析通用儀器有限公司），MD6M微波消解儀（APL），ICP-Qc型電感耦合等離子體質譜儀（美國賽默飛世爾科技有限公司）。 　　2 方法與結果
　　2.1 供試品的制備 將供試品置于恒溫60 ℃的烘箱，烘2h[11]，精密稱取供試品約0.5g，置于微波消解罐中，加硝酸-30% 過氧化氫（V/V 7∶3）的混酸溶液共10mL，密閉，置于微波消解儀中按表1消解程序進行消解。微波消解結束后，冷卻取出，揮去濃煙，用超純水將消解液轉入50mL量瓶中，用超純水洗滌消解罐3次，洗液并入量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同法制備空白溶液。
　　2.2 標準曲線及檢出限 以1 %硝酸溶液稀釋配制含Pb、As、Cd為 0.2、1、5、10、20、50ng/mL，含Cu為1、5、10、20、50、100ng/mL的系列濃度混合溶液[13]，以超純水稀釋配制Bi、In、Ge 濃度均為1μg/mL的混合內標液[14]，并使用ICP-MS測定標準曲線;以1 %硝酸溶液稀釋配制含Hg為0.05、0.1、0.5、1、2、5ng/mL的系列濃度溶液，使用非色散原子熒光光度計測定。對試劑空白進行11次測定[15]，以待測元素響應值的3倍標準偏差除以標準曲線斜率，即可得該元素的方法檢出限，結果詳見表2。
　　2.3 精密度試驗 取編號為“S1”的黑冰片樣品微波消解后，分別連續測定6次，測定各元素RSD范圍均在1.42 %～2.66 %之間。
　　2.4 重復性試驗 取編號為“S1”的黑冰片樣品微波消解后，平行6份，按“2.1”項下前處理方法進行消解，得到6份供試液，測定各元素RSD范圍均在1.27 %～ 4.11 %之間。
　　2.5 穩定性試驗 取編號為“S1”的黑冰片樣品微波消解后，每隔4h測定一次共測6次。供試品溶液中各元素RSD范圍均在0.96%～ 4.91%之間，表明消解方法所得的供試品溶液在24 h內穩定性良好。
　　2.6 加樣回收試驗 對已知含量的編號為“S1”的黑冰片樣品作加樣回收試驗。按“2.1”項下方法進行前處理，得到6份供試液作回收率試驗。由表3微波消解測定5種元素的回收率在84.87%～98.86%之間，RSD≤5 %， 表明方法準確可靠。
　　2.7 ICP-MS法含量測定 精密稱取各個批次的黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸樣品，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，按表4工作參數，平行測定3次。測得As、Pb、Cd、Cu元素的含量，測定結果見表5～7。
　　2.8 Hg含量測定 精密稱取各個批次的黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸樣品，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，用非色散原子熒光光度計平行測3次，測得Hg元素含量，測定結果見表5～7。
　　3 分析與討論
　　 根據《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》[16]（WM/T22004）中規定砷（As）≤2.0mg/kg，鉛（Pb）≤5.0mg/kg，鎘（Cd）≤0.3mg/kg，汞（Hg）≤0.2mg/kg，銅（Cu）≤20.0mg/kg。對比黑冰片、黑冰片-10味散、十味黑冰片丸中重金屬及有害元素砷的含量，黑冰片中砷、鉛、汞、鎘、銅均大幅超標，而成藥則超標較少。藥材黑冰片在經過正確的配伍、制劑后出現了重金屬及有害元素含量降低的情況，且黑冰片中重金屬及有害元素的總含量約為黑冰片-10味散總含量的四倍，這與黑冰片在該制劑中稀釋倍數基本相符。由此判斷黑冰片是制劑中引入重金屬及有害元素砷的主要因素。有研究證明，黑冰片對大鼠長期使用并無毒性作用[17]，但作為野豬糞便經過高溫碳化所得藥材飲片，黑冰片不易采集，患者順應性差，且具體藥理作用尚未完全確定，所以使用其它藥材替代黑冰片的必要性值得進一步研究。
　　 本試驗建立了黑冰片重金屬及有害元素砷的含量測定方法，具有較好的精密度、重復性、穩定性，且回收率試驗結果中RSD均小于5 %，測定結果準確可靠，滿足檢測要求，可作為黑冰片中重金屬及有害元素測定的方法。同時對黑冰片-10味散、十味黑冰片丸中重金屬的來源作了討論，基于其中重金屬和砷的含量過高，而且黑冰片資源相對匱乏、采集不便且難以控制內在質量，有必要對相關制劑中黑冰片替代必要性進行研究。
　　參考文獻
　　[1]宇妥·元丹貢布. 四部醫典[M]. 上海： 上?？茖W技術出版社， 1987.
　　[2]賈敏如，張藝. 中國民族藥辭典[M]. 北京： 中華醫學電子音像出版社， 2016.
　　[3]斯慶圖娜拉，李詠梅，劉磊. 蒙藥五味清濁散和十味黑冰片散抗幽門螺桿菌的實驗研究[J].中國實驗診斷學， 2016， 20（9）：1546-1547.
　　[4]仁青東主， 華青措， 斗周才讓，等. 藏藥復方治療慢性萎縮性胃炎的療效與機理探析[J]. 中華中醫藥學刊， 2016， 34（11）：2577-2579.
　　[5]常亮， 董珉翔， 劉靜. 黑冰片質量控制的研究[J]. 中國民族醫藥雜志， 2016， 22（12）：21-22.
　　[6]王玉光. 用分光光度法測定蒙藥黑冰片中的鐵的含量[J]. 內蒙古財經學院學報（綜合版）， 2009， 7（6）：86-88.
　　[7]徐秀廷， 阿力塔， 左明輝， 等. 蒙藥炮制對黑冰片鉛含量影響[J]. 光譜實驗室， 2007（3）：351-353.
　　[8]阿召， 何強， 張雪菊. 十味黑冰片丸中沒食子酸含量HPLC測定方法[J]. 西部中醫藥， 2013， 26（9）：42-44.
　　[9]馮尚紅， 劉海紅， 虎延龍. HPLC法測定十味黑冰片丸中桂皮醛的含量[J]. 北方藥學， 2013， 10（5）：12-13.
　　[10]劉靜， 李樹先， 朱江， 等. 淺談幾種重金屬元素對人體的危害及其預防措施[J]. 中國資源綜合利用， 2018， 36（03）：182-184.
　　[11]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（四部） [M]. 北京： 中國醫藥科技出版社， 2015： 205.
　　[12]何雯菁， 楊曙明， 薛佳俐， 等. 集約化豬場污染物中銅、鋅、鉻、砷、鉛的檢測[J]. 農產品質量與安全， 2018（2）：66-70.
　　[13]姜濤， 施枝江， 陳林明，等. ICP-MS法測定不同產地蓮子及蓮子不同部位中5種重金屬元素含量[J]. 亞太傳統醫藥， 2018（10）：55-58.
　　[14]鄭明， 金情政， 胡衛南， 等. ICP-MS法同時測定半夏糖漿中6種重金屬元素的含量[J]. 中國藥師， 2018， 21（9）：1672-1674.
　　[15]符傳武， 李玲. 微波消解ICP-MS法測定壯藥美巧杯中5種重金屬的含量[J]. 中國民族民間醫藥， 2014 （21）：20-22.
　　[16]WM2-2001.藥用植物及制劑進出口綠色行業標準[S].北京：中國標準出版社，2001.
　　[17]李瑞萍， 常亮， 白音夫. 蒙藥黑冰片對大鼠長期毒性作用[J]. 中國民族醫藥雜志， 2011， 17（4）： 53.
　　（收稿日期：2018-11-27 編輯：程鵬飛）
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