麝香保心丸對代謝綜合征大鼠血管重構的影響
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【摘要】目的：觀察麝香保心丸對代謝綜合征（MS）大鼠主動脈重構的影響。方法：用高果糖飲食飼養SD大鼠建立代謝綜合征大鼠模型，成功后大鼠隨機分為模型對照組和麝香保心丸干預組，用Masson染色血管膠原沉積情況，用放射免疫法檢測大鼠血清單核細胞趨化蛋白-1（MonocyteChemoattractantprotein-1，MCP-1）含量，用免疫組化法檢測主動脈MCP-1受體表達。結果：高果糖飲食可成功誘導高血壓、高甘油三酯血癥和高血糖等特征的代謝綜合征模型，Masson染色可見MS組大鼠主動脈有明顯膠原沉積，與正常對照組相比，模型對照組血清MCP-1含量明顯增加，主動脈MCP-1受體表達亦同步上調。用麝香保心丸干預后，MCP-1表達下調，同時，血管膠原沉積有所減輕。結論：麝香保心丸可改善代謝綜合征大鼠血管重構，可能與下調MCP-1表達有關。
【關鍵詞】麝香保心丸;代謝綜合征;血管重構;MCP-1
【中圖分類號】R285.5【文獻標志碼】A【文章編號】1007-8517（2019）1-0012-03
Abstract：Objectives[JP2]ToinvestigatetheeffectofShexiangBaoxinPill（SXBXP）onVascularremodelinginmetabolicsyndrome（MS）modelrats.MethodsMSmodelofratswereinducedbyhighfructosedietforeightweeks，thentheywererandomlydividedintoMSgroupandMSplusSXBXPgroup.TheMonocyteChemoattractantprotein-1（MCP-1）contentsweredetectedbyradioimmunoassay，andtheexpressionsofcorrespondingreceptorsweredeterminedbyimmunohistochemistry.TheexpressionofcollagenwasdeterminedbyMassonstaining.ResultsTheMSmodelofratswereinducedbyhighfructosedietsuccessfully.MassonstainingshowedthattherewerecollagendepositedinaorticwallofMSrats.MCP-1contentsinserumonMSgroupwereincreasedsignificantlythanthoseinthecontrolgroup（P<0.01）.Meanwhile，theexpressionsofcorrespondingreceptorwereup-regulatedobviously.Inaddition，SXBXPdietcouldreducethedegreeofMCP-1content，inthesametime，thecollagendepositionofvascularwasrelieved.ConclusionOursresultsindicatedthatSXBXPsignificantlyimprovethevascularremodelingonMSmodelratspartlythroughreducingMCP-1content.[JP]Keywords：ShexiangBaoxinPill（SXBXP）;MetabolicSyndrome;VascularRemodeling;MCP-1
代謝綜合征[1]（MetabolicSyndrome，MS）包括高血壓、高脂血癥和血糖代謝異常等心血管危險因素，可導致血管內皮功能障礙和動脈粥樣硬化等心血管疾病的發生發展，并導致血管重構，是目前冠心病、腦梗塞等常見心腦血管疾病發病率升高的主要因素之一。因此，防治MS導致的血管重構除了控制相應的危險因素，還需要具有血管保護或抗動脈粥樣硬化的藥物。麝香保心丸具有舒張血管、抑制炎癥反應、抗動脈粥樣硬化及抑制血管鈣化等作用[2-3]，在臨床上治療心絞痛、心肌梗死等發揮了很大的作用，能否改善MS導致的血管重構尚不清楚。為此，本實驗在MS大鼠模型上，用麝香保心丸干預，觀察血管重構的變化，并觀察血清MCP-1及主動脈相應受體表達的變化，初步探討相關可能的機制。
1材料
1.1動物無特定病原體級（SPF）雄性SD大鼠由汕頭大學醫學院實驗動物中心提供，8周齡。
1.2材料高果糖飼料（60%，北京華阜康生物科技有限公司）;MCP-1試劑盒（北京華英生物研究所）;MCP-1受體一抗、二抗及DAB顯色試劑盒（武漢博士德）;其余為進口或國產分析純試劑。麝香保心丸（批號：12050401，上海和黃藥業有限公司）。[JP]1.3儀器BP-2010A鼠尾動脈測壓儀（北京軟隆生物）;BeckmanCoulterAU5800生化儀;血糖試紙及快速血糖儀購自美國雅培。
2方法
2.1MS動物模型制備參照參考文獻[4]制備大鼠MS模型，取雄性SD大鼠8只作為正常對照組，普通飼料喂養;取16只雄性SD大鼠作為MS組，高果糖飼料喂養8周后，檢測血糖、血脂和尾動脈壓水平，以確定MS模型建立成功（高血糖、高血脂及高血壓狀態）。將造模成功的MS大鼠隨機分成MS組（8）和MS+麝香保心丸組（8），繼續高果糖飼料喂養，MS+麝香保心丸組予麝香保心丸25mg/kg灌胃1次。飼養4周后稱重后，3%水合氯醛麻醉，心臟取血，血液置入含有促凝劑的5mL塑料試管中，充分混勻，4度離心分離血清，-80℃保存。摘取胸主動脈，用冰生理鹽水沖洗后，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋。
2.2血糖、甘油三酯和血壓的測定禁食8h后尾動脈取血，采用快速血糖儀檢測血糖，并分離血清，采用BeckmanCoulterAU5800生化儀檢測血清甘油三酯水平;采用鼠尾動脈測壓儀測量血壓。 2.3血清MCP-1含量的測定將血清送至北京華英生物研究所，采用放射免疫法測定血清MCP-1含量，具體步驟按試劑盒說明書操作。
2.4免疫組織化學法檢測主動脈組織MCP-1受體的表達采用4%多聚甲醛固定胸主動脈，石蠟包埋，制作4μm厚切片，常規脫臘入水，抗原修復，封閉非特異性抗原，滴加一抗過夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復染，鹽酸酒精分化、脫水、透明、中性樹膠封片，具體步驟按說明書進行。
2.5統計學方法采用SPSS12.0統計軟件進行統計分析。計量資料以均數加減標準差（x±s）表示，兩組比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析法，兩兩比較采用q檢驗。以P<0.05表示差異有統計學意義。
3結果
3.1大鼠MS模型特征經高果糖飼料喂養8周后，大鼠血清血糖、甘油三酯和尾動脈壓水平明顯高于正常對照組（P<0.01），提示MS模型建立成功。見表1。
3.2Masson染色采用Masson染色觀察大鼠主動脈組織，與正常組比較，MS大鼠發現血管全層均有明顯膠原沉積，血管細胞和彈力纖維排列紊亂，管壁增厚，用麝香保心丸干預后膠原沉積有所改善。見圖1。
3.3大鼠血清MCP-1含量的變化MS組血清MCP-1含量明顯增加（P<0.01），采用麝香保心丸干預后，血清MCP-1含量有所下降（P<0.01）。詳見表2。
3.4大鼠胸主動脈組織MCP-1受體表達的變化與正常組相比，MS組主動脈組織MCP-1受體表達明顯上調，用麝香保心丸干預后，主動脈組織MCP-1受體表達有所下調。見圖2。
4討論
隨著近年來國民生活條件改善和生活方式的改變，肥胖人群越來越多，導致MS的患病率明顯增加，包括高血壓及糖脂代謝異常等多種心血管危險因素，這些危險因素均可導致血管損傷，最終導致血管重構的發生。實驗研究發現MS大鼠模型可出現血管重構，表現在血管內膜及中膜不均一增厚，結構紊亂，平滑肌細胞增殖明顯，涉及的可能分子機制包括炎癥因子、一些血管活性因子及脂肪細胞因子等生物效應相關[4-5]。因此，探索參與血管重構的機制，為其防治提供新的策略，具有重要的間接臨床意義。
本實驗采用高果糖飼料喂養后，血清血糖、甘油三酯水平及尾動脈壓明顯高于對照組，提示大鼠MS模型建立成功。同時發現MS大鼠主動脈大量膠原沉積，血管細胞排列紊亂，提示主動脈重構，與國內外學者研究一致。同時血清MCP-1水平明顯高于正常組，同時主動脈組織MCP-1受體的表達亦同步下調，而MCP-1是體內重要的促炎癥因子，可誘導炎癥細胞聚集，產生并加重局部組織的炎癥反應，而炎癥貫穿于血管重構始終，是導致血管功能及解剖結構異常重要分子機制之一，加劇動脈粥樣硬化的發生發展，也促進血管重構的發生與發展。
麝香保心丸在臨床上作為一種常用治療冠心病的有效藥物，對緩解心絞痛、改善心肌缺血等有顯著的作用。本實驗用麝香保心丸干預后，MS大鼠主動脈膠原沉積有所減輕，血清MCP-1水平明顯下降，主動脈組織MCP-1受體表達同步下調，這提示麝香保心丸有明顯的抑制炎癥反應的作用，并可改善血管重構，可能是改善血管重構的重要分子機制之一。
實驗發現麝香保心丸可改善MS大鼠誘導的血管重構并抑制MCP-1及其受體的表達，這將為血管重構的機制研究及防治提供新的思路和作用靶點，具體的分子作用機制和細胞內信號轉導通路尚需進一步研究證實。由于植物提取物成分和有效成分作用靶點的復雜性，中藥成分對保護血管內皮功能的藥理學作用尚需進一步研究。
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