不同干燥方法對商陸總皂苷和皂苷甲含量的影響

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　　摘要：利用硫酸-香草醛比色法測定商陸（Phytolacca americana）總皂苷含量，采用HPLC-UV法測定商陸皂苷甲的含量。結果表明，商陸總皂苷和皂苷甲的含量比較，陰干商陸明顯低于其他組，曬干商陸次之，烘干品含量較高;其中低溫55 ℃烘干品的商陸總皂苷含量最高，80 ℃烘干的商陸皂苷甲含量高于其他組。商陸產地加工中，應及時干燥，避免成分流失，規?；娓蓛炗趥鹘y曬干，采用低溫烘干為宜。
　　關鍵詞：商陸（Phytolacca americana）;產地加工;干燥方法;總皂苷;皂苷甲
　　中圖分類號：S13         文獻標識碼：A
　　文章編號：0439-8114（2019）08-0126-03
　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.08.029           開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：
　　Abstract： UV spectrophotometry was used to determine total saponins of Phytolacca americana by the sulphuric acid vanillin colorimetric method，HPLC-UV Method was used to determine the content of esculentoside A. Results showed that their contents of the group dry in the shade were Significantly lower than the other groups，the group dry in the sun were the second from the bottom，the group dry hot air were higher. Among them， the content of total saponin of Phytolacca americana was the highest dry at 55 ℃， and the content of esculentoside A was the highest dry at 80 ℃. It should be dried in time， avoiding the loss of ingredients， drying in large scale is better than traditional drying， and drying at low temperature is advisable.
　　Key words： Phytolacca americana; producing processing; drying method; total saponins; esculentoside A
　　商陸藥材為商陸科植物商陸（Phytolacca acinosa Roxb.）或垂序商陸（Phytolacca amerrcana L.）的干燥根[1]，是中醫臨床常用的中藥，同時也是部分民族醫學的常用藥。商陸根莖肥大，干燥后切片困難，一般在產地鮮切后干燥制成商品藥材，再由飲片廠進一步加工炮制制備成飲片入藥。商陸的炮制技術已經非常成熟，現行《藥典》各地的炮制規范都有明確的規定，但其產地加工仍然由各地藥農自行完成，加工粗獷，造成飲片原料的質量參差不齊。目前，人們對商陸的研究，多以總皂苷和皂苷甲的變化來評判商陸加工炮制后減毒增效的效果[2]。為了弄清商陸產地加工對商陸有效成分產生的影響，現以商陸總皂苷和皂苷甲含量為指標對其產地加工的主要環節——干燥方法進行考察。商陸總皂苷的測定擬采用硫酸-香草醛比色法顯色，紫外可見分光光度計測定[3]。測定商陸皂苷甲常采用有HPLC-ELSD法[4]，但存在重復性較差的缺點，擬采用HPLC梯度洗脫，紫外210 nm檢測[5]。
　　1  材料與方法
　　1.1  材料
　　1.1.1  樣品  商陸樣品于2016年10月在信陽市平橋區采挖，經信陽農林學院周巍副教授鑒定為商陸科植物垂序商陸的新鮮根莖。
　　1.1.2  試劑與儀器  商陸皂苷甲對照品（上海譜振生物科技有限公司，ZY151023），葡萄糖對照品（中國計量科學院，GBW10062），水為超純水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。
　　UV1801型紫外-可見分光光度計、L600-DP6型高效液相色譜儀（北京普析通用有限公司）。
　　1.2  方法
　　1.2.1  樣品處理  商陸采挖后，洗凈，除去蘆頭和須根，按照不同產地和大小分為10組，分別切成2 mm厚片。
　　1）曬干。將切好的商陸片均勻攤在托盤中，厚度2 mm左右，于晴天上午8時至下午5時，置陽光下曝曬5 d，商陸片用手握頂手，易折斷，收集，密閉，備用。
　　2）陰干。將切好的商陸片均勻攤在托盤中，厚度以不相互疊加為宜，置通風室內，室溫15～20 ℃。7～11 d，商陸片用手握頂手，易折斷，收集，密閉，備用。
　　1.2.2  烘干
　　1）低溫烘干。將切好的商陸片均勻攤在托盤中，厚度2 mm，置熱風循環烘箱，55 ℃干燥，商陸片用手握頂手，易折斷，收集，密閉，備用。
　　2）高溫烘干。將切好的商陸片均勻攤在托盤中，厚度2 mm，置熱風循環烘箱，80 ℃干燥，商陸片用手握頂手，易折斷，收集，密閉，備用。 　　1.3  商陸總皂苷含量測定
　　1.3.1  對照品溶液的制備  精密稱定商陸皂苷甲對照品20 mg，用甲醇定容至10 mL（每1 mL甲醇含商陸皂苷甲1.98 mg），制備成對照品溶液。
　　1.3.2  供試品溶液的制備  精密稱取商陸粉末4 g，加95%乙醇80 mL，用索氏提取器回流至回流液不再發生皂苷反應為止。用旋轉蒸發儀將提取液減壓濃縮至10 mL，置蒸發皿中，加入5 g硅藻土拌勻，于水浴鍋上揮干。將所得硅藻土置100 mL錐形瓶中，加50 mL用水飽和的正丁醇，超聲輔助提取40 min后過濾，將濾液減壓濃縮至干，用少量甲醇溶解殘渣，10 mL容量瓶定容，過濾，取續濾液1 mL，再用甲醇定容至10 mL，制備成供試品溶液。
　　1.3.3  檢測波長的選擇  取供試品溶液1.0 mL，加入香草醛乙醇溶液（8%）0.5 mL，硫酸（77%）8.5 mL，60 ℃水浴10 min，然后冰水浴15 min。用紫外可見分光光度計進行全波長掃描，結果顯示在450 nm處有最大吸收峰，與參考文獻[6]記載相符，故設定檢測波長為450 nm。
　　1.3.4  線性范圍考察  精密量商陸皂苷甲對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，加甲醇補足至1.0 mL，按“1.3.3”項下香草醛-濃硫酸法處理顯色，用紫外外可見分光光度計450 nm處測定吸光度（A），以吸光度對濃度作直線回歸，得回歸方程Y=3.354 2X+0.130 6（r=0.999 5），表明商陸皂苷甲在0.198～1.98 g/L濃度范圍與吸光度呈良好的線性關系。
　　1.3.5  精密度試驗  精密量取對照品溶液1.0 mL，重復上述操作6次，RSD為1.32%，表明精密度良好。
　　1.3.6  穩定性試驗  精密量取供試品溶液1.0 mL，重復上述操作，顯色后每隔5 min測定1次，共7次。RSD為1.61%，表明該試驗操作在30 min內保持穩定。
　　1.3.7  重復性試驗  取同一批次商陸樣品6份，重復上述操作，RSD為1.37%，表明該試驗操作的重復性良好。
　　1.3.8  加樣回收率試驗  精密稱定商陸樣品（總皂苷質量分數1.762%）2.0 g，共6份，分別加入商陸皂苷甲對照品10 mg，重復上述操作，計算商陸總皂苷的平均回收率100.13%，RSD為1.78%，表明該方法準確可靠。
　　1.4  商陸皂苷甲的含量測定
　　1.4.1  色譜條件  PM952505-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以含甲酸（0.1%）的乙腈為流動相A，0.1%甲酸溶液為流動相B，按照表2所示方法進行梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，檢測波長為210 nm，柱溫30 ℃，進樣量為20 μL，理論板數按商陸皂苷甲計不低于3 000[3]。
　　1.4.2  對照品溶液的制備  精密稱定商陸皂苷甲對照品5.2 mg，用甲醇定容至10 mL（每mL含商陸皂苷甲0.52 mg），即得。
　　1.4.3  供試品溶液的制備  精密稱取商陸粉末2 g置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，稱重，超聲處理（500 W，40 kHz）40 min，用50%甲醇補足重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
　　1.4.4  線性關系考察  精密量取“1.4.2”中的對照品儲備液，分別進樣3、6、9、12、15 μL注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測定，以峰面積的積分值為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=1.430 2X+9.311 8（r=0.999 8），表明商陸皂苷甲在1.56～7.80 μg線性關系良好。
　　1.4.5  精密度試驗  精密吸取0.52 g/L商陸皂苷甲對照品溶液進樣20 μL，重復進樣5次，峰面積的RSD為1.7%，表明精密度良好。
　　1.4.6  穩定性試驗  取商陸樣品粉末量，按“1.4.3”方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、12、24 h測定商陸皂苷甲含量，峰面積的RSD為0.36%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。
　　1.4.7  重復性試驗  取商陸樣品粉末，按“1.4.3”方法制備供試品溶液，平行試驗6份，結果樣品中商陸皂苷甲平均質量分數為0.79%，RSD為1.42%，表明該試驗方法的重復性良好。
　　1.4.8  加樣回收試驗  精密稱取已知含量的商陸粉末共6份，每份0.5 g，各組分加入商陸皂苷甲對照品2 mg，按“1.4.3”方法制備供試品溶液，測定商陸皂苷甲含量，計算回收率，結果見表3。
　　2  試驗結果
　　將不同干燥方法加工的商陸樣品，采用上述方法測定商陸總皂苷和皂苷甲含量，結果用SPSS 19.0軟件處理。如表4所示。
　　3  討論
　　1）由上述試驗結果可以看出，陰干的樣品中商陸總皂苷和皂苷甲含量均明顯低于其他組，曬干樣品次之，烘干樣品含量較高。低溫55 ℃烘干樣品的商陸總皂苷含量最高，80 ℃烘干的商陸皂苷甲含量最高。陰干加工與其他組具有顯著差異，故不建議在產地加工中應用，由此可推定，商陸鮮切加工后應及時干燥，避免有效成分流失。曬干品與烘干組存在差異，但不顯著，為了提高藥材質量，產地最好采用烘干方法加工。低溫烘干和高溫烘干結果存在差異，但不顯著，從整體而言，低溫烘干優于高溫烘干品。 　　2）商陸的有效成分和毒性成分均為總皂苷，關于加工炮制后總皂苷和指標性成分皂苷甲的變化，現代研究結果差異很大，薛光輝等[6]認為加工炮制后上述成分含量降低，從而達到減毒的作用，但和增效的結果相違背。陳琳等[2]得出了加工炮制后，上述成分含量增高，同時藥效增加高的結論，但又和毒性降低相矛盾。李林等[3]、孟祥龍等[7]得出了加工炮制過程中上述成分呈動態變化的規律。在商陸產地加工過程中，應盡量多保留活性成分，以便后面的炮制。通過試驗，可以初步確定低溫55 ℃烘干為商陸產地加工的最佳方法。
　　3）本試驗中采用的加工方法是模擬生產中條件而設，但與實際生產存在一定的差距，今后將進一步在生產中驗證是否存在上述規律[8，9]。商陸中皂苷成分復雜，結構變化較多，含有20多種皂苷和30多種皂苷元。產地加工中，這些成分的變化規律尚未有人進行研究。另外，產地加工對藥效的研究尚不明晰。
　　參考文獻：
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　　收稿日期：2018-06-29
　　基金項目：國家中醫藥行業專項（2015468002-2）;信陽市科技攻關項目（150089）
　　作者簡介：謝其亮（1970-），男，河南信陽人，工程師，主要從事中藥制藥研究，（電話）13939722266（電子信箱）915036515@qq.com;通信作者，楊俊杰（1979-），男，河南南陽人，副教授，碩士，主要從事中藥材產地加工及活性成分開發研究，（電子信箱）nanyangjj@xyafu.edu.cn。
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