桉樹組培工廠化育苗中培養基的調配研究
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摘要：桉樹作為我國重要的林業資源，由于桉樹具有速生豐產林造林的優勢，因此也成為了我國造林主要樹種，在林產業中的比重非常大。對桉樹組培工廠化育苗中培養基的調配展開研究，采用了尾巨桉無性系組培苗進行試驗，分析影響培養基性能的主要因素。基于此，本文桉樹組培工廠化育苗中培養基的調配方法與影響因素，繼而提出桉樹組培技術。
關鍵詞：桉樹組培;培養基;調配;組培技術
中圖分類號：S723.1文獻標識碼：ADOI：10.19754/j.nyyjs.20190615031
引言
桉樹生長速度非?？?，并且在我國南方熱帶、亞熱帶地區分布廣泛，林業領域中，桉樹由于產量高、質量好，成為了主要的造林育林品種。當今人們對木產品需求量越來越高，這也推動了桉樹組培工廠化育苗技術的發展。但由于桉樹組培育苗具有周期性特點，這也突出了培養基調配的重要性，科學調整培養基，保證培養基的有效性，實現繼代增殖的目標，提升有效發芽率，最終會落實到林產品產能方面。所以，加強桉樹組培工程化育苗中培養基的研究有著重要意義。
1桉樹組培的重要意義
1.1優良遺傳材料快速繁殖
新的優良品種、優良單株可以在短期內大量繁殖，并且在培育1～2a即可生產。
1.2脫毒良種苗培養以及無病毒苗繁殖
通過莖尖培養和脫出病毒，即可提升桉樹的生產效能。對于桉樹來說，需要重點脫出青枯病病毒。
1.3特殊育種材料的快速繁衍
眾所周知多倍體最大的特點就是不育，想要繁殖只能通過無性繁殖，但是多倍體在無性繁殖之后可以保留性能。例如楊樹多倍體在實際試驗中就取得了很大的成就，在桉樹領域也有很大的發展空間。
1.4基因工程植株快速繁衍
通過良好的母體進行細胞轉基因培養，即可得到轉基因植物，這些植物不僅帶有母體優勢，還可以生成新的能力，如抗病蟲害、提升產能等。受體除了母體，還有器官、組織等，采用根癌農桿菌作為載體，在組織器官中轉入基因，做好組織培養從而獲取性能更強的轉基因植株。
1.5自然、人工誘變有用突變體快速繁衍
優良遺傳材料主要是芽變材料、人工誘變材料，通過培養組織的方法繼代繁殖，提高生產效能。
1.6離子保存種質快速繁衍
無菌材料采用超低溫保存方法，包括體細胞、無菌芽等，通過組織培養的方式即可進行繁殖。
2桉樹組培工廠化育苗中培養基調配與影響因素2.1試驗材料
以巨尾桉優良單株離體芽器官誘導培養擴散的組培繼代作為實驗材料。
2.2試驗方法
2.2.1培養基中添加劑那不同瓊脂
將經相同繼代培養的繼代苗加接入到添加6.8g/L 瓊脂條和3.8g/L 瓊脂粉的培養基當中，使用50個接種瓶同時培育，連續接種3代進，分析每一代的性能，將變異苗剔除，變異苗率檢測每隔1個月進行1次。
2.2.2培養基中添加不同濃度激素組合
基本培養基內加入濃度不同的激素組合的6-BA和NAA，分為50個試驗體，重復3次，在1個月之后進行統計分析。
2.2.3大量元素濃度對桉樹生根率、后續成長的影響
培養基當中元素濃度分別為50%、40%、25%、10%，每一處理50瓶，重復3次，每隔15d進行生根率統計，在30d、40d、50d分別觀察試驗情況。
2.2.4ABT、NAA對生根、組培苗的影響
經基本壯苗培養基6-BA+NAA 3代培養之后，在元素濃度為40%基礎上，附加生長素濃度為0.5mg/L的ABT和NAA，每一處理50瓶，重復3次，15d后對生根率、根長、苗高進行記錄，獲取平均值。
2.3結果討論
2.3.1瓊脂類型
在培養基下，變異苗率會隨著瓊脂添加率變化而產生變化。在添加了瓊脂條之后，不同代數變異苗率十分穩定，1～3代在4%之內。而添加了瓊脂粉之后，會隨著代數增加，變異苗率持續增加，3代變異苗率提升到了25%，是1代的9倍。再者添加了瓊脂條和瓊脂粉之后，1代培養變異苗率的差異不大，2代后培養的差異變化明顯。由此可見，在添加瓊脂粉培養基中的變異苗表現為莖呈現壓扁的不規則形狀，并且葉片缺失，瓊脂條變異率低，苗木表現十分正常。
2.3.2繼代培養階段中激素農速
在繼代增殖培養過程中，需要選擇正確的激素濃度組合，這也是獲得理想繼代苗的關鍵。在繼代增殖中，6-BA濃度從0.25～0.30mg/L ，NAA0.10～0.15mg/L 皆可，但是繼代苗生長有所差異。在試驗當中，如果6-BA濃度超過了0.3mg/L時，玻璃苗數量明顯增加。在實際生產應用中，使用6-BA濃度在0.27～0.3mg/L 的情況下，增殖繼代苗較為理想，所以濃度最好不超過3.0mg/L 。在壯苗階段，1.5cm以上有效苗率存在著差異，試驗觀察中6-BA濃度分別在0.27mg/L 和0.25mg/L時，有效苗率差別不大，但繼代增殖存在著明顯差異。在壯苗生根過程中，由于采用了邊生根邊繼代的方法，所以該階段要嚴格控制培養基的激素濃度，不僅要能夠確保有效苗數量，還需要在一定的增值苗中實現再次繼代，通過對比分析可知，6-BA濃度為0.27mg/L ，NAA濃度為0.10～0.15mg/L配比最佳，在實際生產當中可以根據實際情況進行調整。
2.3.3生根培育階段大量元素濃度選擇
在經附加相同種類、濃度的細胞分裂素、生長素的壯苗生長完畢之后，生根培養基附加相同類型、濃度的生長素，在試驗完畢之后，發現大量元素濃度與組培苗生根率成反比例，也就是大量元素濃度降低生根率升高，但后續生長情況表現出了明顯差異。大量元素濃度在50%時，生根率達到了90%以上，在接種后50d性能良好，少部分葉片發黃，大部分依然嫩綠;如果大量元素濃度在40%以內時，生根率也超過了95%，在接種50d苗木葉色濃綠、生長態勢良好，葉片變黃數量非常少;大量元素濃度在25%以下時，苗木生根率有了明顯增高，達到了98%以上，但是后續生長受到了嚴重的影響，在接種的30d之后苗木葉尖位置變黃，待到40d之后大部分葉子變黃，待到50d之后葉色整體偏黃并枯萎。 2.3.4生根培養階段激素種類和濃度配比
在壯苗期通過6-BA0.27mg/L和NAA0.15mg/L配比獲得生根瓶苗，經過了3代繼代培養，瓶苗生根率明顯降低，之后通過調整，使用ABT0.5mg/L和NAA0.5mg/L可以獲得較好的生根率，達到了95%左右，根長與苗高生長不同，15d之后根長為0.5～0.8cm，苗高在1.5～1.8cm范圍。
3培養基的制作要點與建議
通過上述相關方案進行分析發現，培養基調配過程精度要求高、實施環節復雜，如果一個環節出現了問題會影響整個培養基性能。從經濟性方面考慮，要嚴格控制每種材料的應用量，由于過去都是采用瓊脂粉，但是在繼代培養之后會增加變異苗率，這是因為瓊脂中含有大量重金屬、微量元素。所以在培養基調配當中盡可能使用瓊脂條，在生根培養基中添加瓊脂粉。
繼代培養激素濃度調配較為粗放，為了能夠提升繼代增殖效率，需要將6-BA控制在0.25～0.30mg/L之間，NAAS控制在0.10～0.15mg/L之間。壯苗階段培養基調配需要根據有效苗率、繼代增殖進行考慮，此時的6-BA濃度為0.27mg/L，NAA濃度為0.10～0.15mg/L范圍。
大量元素含量會直接影響升高，需要重點考慮生根率、生長情況、后續生長等，所以在培養基調配中，要采用40%配比最為理想。由于苗木后續生長存在著差異，在大量元素含量40%情況下，生根苗放置時間更長，多達50d，而大量元素含量在25%情況下，可以放置30d，而大量元素含量在10%時，放置時間非常短，不宜采用。
生根培養基當中，需要控制激素濃度，在3代培養之后需要調節濃度，否則會降低生根率，最佳添加量為ABT0.5mg/L和NAA0.5mg/L。
參考文獻
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作者簡介：黃全東（1981-），男，本科，工程師，研究方向：森林培育、林木種苗快繁研究和苗木工廠化生產。
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